PCR和克隆是我們十分熟悉的技術，熟悉到我們都有些陌生了，不清楚的進展。其實，方法一直在努力擴大其用途，近年來也有一些讓人吃驚的結果。那么，這些經過時間考驗的技術又將會帶來一個怎樣的未來？也許會是更大、更快、更小。細胞 1. 更大。你想要將一個DNA片段插入載體中？沒問題。那么兩個片段呢？好吧，難一點，但是也能做到。那五個怎么樣？如今我們正走入一個灰色地帶；這可能需要一些時間。隨著研究人員在合成生物學等領域的研究愈加深入，他們需要一些克隆方法，以一種簡單的方式插入多個DNA片段，比如不依賴于連接的克隆（LIC）或Gibson拼接。 Gibson拼接是JCVI的Daniel Gibson在2009年發(fā)明的新方法。它利用核酸外切酶、DNA聚合酶和DNA連接酶進行拼接，需要相鄰的具有重疊序列的DNA片段。核酸外切酶從5’ 端降解核苷酸，且不與DNA 聚合酶競爭。雙鏈DNA 被消化產生突出的單鏈DNA，重疊序列特異性退火，此時，外切酶逐漸熱失活。DNA聚合酶和DNA連接酶修復連接成完整的雙鏈 DNA分子，從而實現無痕拼接。這種技術非常，而我們有理由相信，2014年在大規(guī)模基因拼接上有更多改進。細胞 2. 更快。PCR需要時間。我們需要反復的變性、退火和延伸，才能產生足夠量的產物用于分析。但如果這一過程能夠加快而不影響質量呢？在過去幾年，隨著DNA聚合酶和PCR儀器的改造，PCR技術已經變得越來越快。然而，隨著人們對個性化醫(yī)療和基因檢測的興趣日益增加，也希望看到新的快速且高質量的PCR方法。目前，許多新的測序策略都依賴重新改造的聚合酶，這也預示著迷你PCR的革命。2014年，我們有望看到這些重新改造的聚合酶的更多應用，包括更快的PCR循環(huán)條件，更小、可移動的儀器，將PCR從傳統(tǒng)實驗室的局限中解放出來。 3. 更小。近兩年，單細胞成為大家關注的焦點。盡管我們有大量關于細胞群體的數據，但我們對單個細胞的行為還是知之甚少，比如它如何應對特定的刺激。在2013年，許多研究都關注單細胞水平的生物學，而研究人員也熱衷于每次對一個細胞進行研究。 盡管單細胞分析存在不少挑戰(zhàn)；起始材料的量太少，很難確保只有單個細胞。但隨著新技術的出現，如數字PCR和微滴式數字PCR，以及微流體技術的改進，研究人員也開始實現單細胞生物學的探索。到2014年，我們預計單細胞應用的數量會激增，而適用于單細胞的PCR方法也會如雨后春筍般冒出來，帶來新的生物學發(fā)現。 |
