(一)原理 白介素一6(interleukin一6，IL一6)在體外能促進B細胞雜交瘤的生長，故又稱為雜交瘤生長因子(HGF)。小鼠B細胞雜交瘤細胞只有在IL一6存在的培養基中才能生長，可以作為指示細胞來測定待檢樣品中IL-6水平。這類IL一6依賴的小鼠B細胞雜交瘤細胞系有MH60·BSF2、B9、7TDl、KD823等，其中以MH60·BSF2細胞使用zui多。 (二)材料 1．IL-6待測樣品，用10％FCS RPMI 1640培養液倍比稀釋。2．IL一6標準品。 3．IL一6依賴的MH60·BSF2細胞系。 4．10％FCS RPMI l 640培養液。 5．MTT(5μg／ml溶于PBS)。 6．酸性異丙醇或二甲基亞砜(DMSO)。 7．酶標儀。 (三)方法 1．取對數生長期的MH60·BSF2細胞，重懸于培養液中。 2．將待測樣本和標準品IL一6倍比稀釋，分別加入96孔培養板中，每孔加入100μl. 3．將懸浮細胞離心棄上清液，配成2×105／ml細胞，加入100μ1于各孔中。 4．37℃、5％CO2孵箱中培養481-l后，加MTT(5mg／m1)，每孔20μl，繼續培養4 h。 5．離心棄上清液，加酸化異丙醇溶液(O．04 mol／L)，每孔200μl，吹打混勻后在酶標儀上測OD值，計算IL一6活性單位。 (四)結果分析 以OD值對IL一6標準品稀釋倍數的對數作標準曲線。測得樣品的OD值后，從標準曲線即可得出樣品IL一6的含量。 (五)注意事項 1．細胞洗滌要充分、輕柔，每次棄洗滌上清液力求*。 2．為了增加檢測方法的敏感性，可采用新復蘇MH60·BSF2細胞。 |
