要防止菌種衰退,應該做好保藏工作,使菌種優良的特性得以保存,盡量減少傳代次數。如果菌種已經發生退化,產量下降,則要進行分離復壯。 (1)菌種的分離菌種發生衰退的同時,并不是所有的菌種都衰退,其中未衰退的菌體往往是經過環境條件考驗的、具有更強生命力的菌體。因此,采用單細胞菌株分離的措施,即用稀釋平板法或用平板劃線法,以取得單細胞所長成的菌落,再通過菌落和菌體的特征分析和性能測定,就可獲得具有原來性狀的菌株,甚至性能更好的菌株。如對芽胞桿菌,可先將菌液用沸水處理幾分鐘,再用平板進行分離,從所剩下的胞子中挑選出*的菌體。如果遇到某些菌株即使進行單細胞分離仍不能達到復壯的效果,則可改變培養條件,達到復壯的目的。如AT3.942棲土曲霉的產孢子能力下降,可適當提高培養溫度,恢復其能力。同時通過實驗選擇一種有利于高產菌株而不利于低產菌株的培養條件。 (2)菌種的復壯菌種的復壯有狹義的復壯和廣義的復壯之分。狹義的復壯指的是菌種已經發生衰退后,再通過純種分離和性能測定等方法,從衰退的群體中找出尚未衰退的少數個體,以達到恢復該菌種原有典型性狀的一種措施。而廣義的復壯應該是一種積極的措施,即在菌種的性能尚未衰退前就經常有意識地進行純種分離和性能的測定工作,使菌種的性能逐步提高,所以,這實際上是一種利用自發突變(正突變)從中不斷進行選種的工作。 (3)提供良好的環境條件進行合理的傳代,減少傳代次數可防止由于菌種的遺傳穩定性變化而引起的自發突變,以及由于環境條件變化導致的退化。菌種允許使用的傳代次數必須通過傳代的穩定性試驗確定。發酵上一般只用三代內的菌種。采用合適的傳代條件使培養條件有利于高產菌的生長,而不利于低產菌的生長,減少突變的發生。細胞 (4)用優良的保藏方法盡可能采用諸如斜面冰箱保藏法、砂土管保藏法、真空冷凍干燥保藏法以及采用干孢子保藏等*的保藏方法保藏菌種,以防止菌種的衰退。 (5)定期純化菌種對菌種進行定期的分離純化,可減少其中自發突變菌株或“突變不*”產生的退休型菌株的增殖機會,保持原來的優良特性。諸如對營養缺陷型菌種在純化過程中提供足夠的營養物,以保持菌株的優勢,避免回復突變體的競爭。同樣在進行抗性突變的菌種純化時在培養基中加入對應于抗性的藥物,可保持菌株的抗性優勢,避免產生無抗性的回復突變體。采用遺傳性穩定的菌體作為菌種、合適的培養基傳代等可減少和防止菌種的自身突變。細胞 |