腫瘤干細胞鑒定 1．一般生物學特征鑒定主要通過觀察腫瘤干細胞的形態和生長特征以及通過核型分打鑒定腫瘤干細胞。形態多為圓形，大小不一。倍增時間較短，細胞生長密度增加，細胞核岔裂指數較高，并且具有無限增殖能力，細胞侵襲能力較強等特征。大部分腫瘤干細胞處于G0期。 2．體外克隆形成能力或腫瘤球形成能力鑒定 (1)克隆形成試驗：將分選的陰性和陽性細胞分別以低濃度接種到96孔培養板，每孔1種100～200個細胞，大約7d后觀察其各自克隆形成情況。 (2)集落形成試驗：白血病干細胞可進行集落形成試驗，將分離的陰性和陽性細胞分別1種到合適的集落培養基中進行培養，一般14 d后觀察集落(>20個細胞)形成數量。白血病干細胞能夠形成小的分散的集落，并且很少發生紅系細胞分化。 (3)實體瘤干細胞的腫瘤球形成試驗：將分離得到的腫瘤干細胞重懸于合適的培養液中，進行倍比稀釋，并接種到96孔培養板，zui終細胞稀釋的范圍從200個／孔到1個／孔。培養7d后，計算腫瘤球形成的總數目以及腫瘤球形成占接種細胞的比例。腫瘤干細胞形成腫瘤球能力更強，得到腫瘤球的比例也增高。 3．分化能力鑒定 (1)體外分化能力的鑒定：常采用免疫細胞化學染色、流式細胞儀分析以及RT—PCR等方法進行鑒定。 (2)體內移植試驗：將腫瘤干細胞注射到有嚴重免疫缺陷的實驗小鼠體內，如一次性注射100、200、500或1000個細胞，然后觀察其體內成瘤的情況。檢測分化出不同成熟細胞的能力。將腫瘤干細胞移植到NOD／SCID鼠內，細胞可以在受體鼠內連續傳代，分離出的腫瘤干細胞二次移植時仍能產生具有異質性癌細胞的腫瘤，并可多次重復，得到的腫瘤與原代腫瘤一致。 4．腫瘤干細胞相關分子表達的檢測 腫瘤干細胞也能檢測到與干細胞自我更新和分化相關的基因表達。例如，腦腫瘤干細胞除了表達CDl33，還具有SOX一2、musashi一1、Bmi一l等神經干細胞和其他干細胞的基因特征。 |
