細胞污染主要是指細胞培養液中混入對細胞生存有害的成分或細胞成分不純。細胞培養時的污染主要包括3個方面：①微生物污染：如支原體、病毒、細菌和真菌。②化學污染：如重金屬或其他非培養必需化學試劑。③細胞交叉污染。本節主要介紹微生物污染。 一、細胞污染的檢測 (一)真菌污染 在微生物污染中，以真菌污染zui多。zui常見真菌：煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、白念珠菌、酵母菌等。真菌種類繁多，形態各異，但污染后很容易發現。肉眼可見，大多呈白色或zui黃色小點漂浮于培養液表面；鏡下觀察呈絲狀、管狀或樹枝狀菌絲，縱橫交錯穿行于細胞之間。但是念珠菌和酵母菌呈卵圓形態，散在于細胞周邊和細胞之間牛長。 (二)細菌污染及其檢測 大腸埃希菌、枯草桿菌、假單胞菌和葡萄球菌等是較常見的污染細菌。細菌污染后大多能改變培養液pH使培養液變混濁；多數情況下培養液短期內顏色變黃，出現明顯污濁現象。也有的對培養液無肉眼可見影響，只在鏡下觀察發現菌體時才能感知污染。 (三)支原體污染 支原體污染是細胞培養中zui常見、不易被察覺并可以干擾實驗結果的一種污染。細胞受支原體污染后，多數細胞無明顯變化，或有微細變化卻由于傳代和換液而被緩解。外觀上往往給人以“正常”的感覺，實則污染細胞會受到多方面潛在的影響，如細胞變形、抑制細胞生長。 不同的微生物污染對細胞的影響有差別，檢測方法也不盡相同：可以通過目測、顯微鏡觀察、電鏡檢查、微生物培養實驗、免疫學和分子生物學等方法進行確定。 二、細胞污染的排除 培養的細胞一旦被微生物污染，應及時處理。通常選高壓滅菌被污染的細胞，然后棄掉。如果有價值的細胞被污染，并且污染程度比較輕，可通過及時排除污染物，挽救細胞恢復正常。常用的排除微生物污染方法有如下幾種： (一)抗生素排除法 抗生素是細胞培養中殺滅微生物的主要手段。一些有價值的細胞被污染后，需用抗生素挽救，在這種情況下，可采用5～lO倍于常用量的沖擊法，加入高濃度抗生素后作用24～48h，再換人常規培養液。 (二)加溫除茵 根據支原體耐熱性能差的特點。有人將受支原體污染的細胞置于4l℃中作用5～10h(zui長可達18h)以殺滅支原體。但41℃對培養細胞本身也有較大影響，故在處理前，應先進行預試驗。確定mzui大限度殺傷支原體而對細胞影響較小的處理時間。 (三)動物體內接種 受微生物污染的腫瘤細胞可接種在同種動物皮下或腹腔，借動物體內免疫系統消滅污染的微生物，腫瘤細胞卻能在體內繼續生長，待一定時間后，從體內取出再進行培養繁殖。 (四)與巨噬細胞共培養 在良好的體外培養條件下巨噬細胞可存活7～10d，并可分泌一些細胞生長因子支持其他細胞的克隆生長。與體內的情況相似，巨噬細胞在體外培養條件下仍然可吞噬微生物并將其消化。利用96孔培養板將極少量的培養細胞與巨噬細胞共培養，可以在高度稀釋培養細胞、極大地降低微生物污染程度的同時，更有效地發揮巨噬細胞清除污染的效能。本方法與抗生素聯合應用效果更佳。 |
