實驗材料與試劑配制： 1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。 2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。 樣品收集、處理及保存 1. 細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 2. 細胞：用PBS反復(fù)洗滌細胞3次，調(diào)整細胞濃度達到104-106 /ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份，或 者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。 3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。 4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上 清。 5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。 7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo) 本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解 凍細胞。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 |
