細(xì)胞培養(yǎng)基本概念 細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)環(huán)境下，使其生長(zhǎng)繁殖，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)物可以是單個(gè)細(xì)胞，也可以是細(xì)胞群。 細(xì)胞培養(yǎng)目的與用途 1、科學(xué)研究：藥物研究開(kāi)發(fā)與基礎(chǔ)研究 藥物研究與開(kāi)發(fā) (1) 新藥篩選：如化學(xué)合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。 (2) 疫苗研究與開(kāi)發(fā)：如病毒性疫苗的研究與開(kāi)發(fā)（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。 (3) 基因工程藥物研究與開(kāi)發(fā)：如干擾素研究與開(kāi)發(fā)，細(xì)胞生長(zhǎng)因子研究與開(kāi)發(fā)等。 (4) 細(xì)胞工程藥物研究與開(kāi)發(fā)：生物活性多肽研究與開(kāi)發(fā)，人參皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究與開(kāi)發(fā)。 (5) 單克隆抗體制備：包括診斷用單克隆抗體，治療用單克隆抗體。 基礎(chǔ)研究 (1) 藥物作用機(jī)理 (2) 基因功能 (3) 疾病發(fā)生機(jī)理 2、 生物制藥 (1) 疫苗：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。 (2) 基因工程藥物：如在臨床醫(yī)學(xué)中具有治療價(jià)值的一些細(xì)胞生長(zhǎng)因子如干擾素、粒細(xì)胞生長(zhǎng)因子、胸腺肽等 (3) 診斷用和藥用單克隆抗體 (4) 細(xì)胞工程藥物：生物細(xì)胞內(nèi)的一些生物活性多肽，生物活性物質(zhì)等 細(xì)胞培養(yǎng)基本條件 1、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基 合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的zui重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。 2、血清 目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中zui重要的成分之一，含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子及其它營(yíng)養(yǎng)成分。 3、無(wú)菌無(wú)毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境 無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累，可導(dǎo)致細(xì)胞中毒死亡。因此，在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，必須保持細(xì)胞生存環(huán)境無(wú)菌無(wú)毒，及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)物。 4、恒定的細(xì)胞生長(zhǎng)溫度 維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定適宜的溫度。 5、合適的氣體環(huán)境 氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。 細(xì)胞培養(yǎng)基種類(lèi)與基本成分 細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，按其來(lái)源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基（目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基），按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類(lèi)。干粉培養(yǎng)基需由實(shí)驗(yàn)者自己配制并滅菌，液體培養(yǎng)基由專(zhuān)業(yè)商家提供，用戶(hù)可直接使用，非常方便。每種細(xì)胞都有其合適的培養(yǎng)基，詳見(jiàn)附表1。 1、合成培養(yǎng)基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽、維生素及其它輔助物質(zhì) 氨基酸 氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨基酸稱(chēng)為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存2 周以上時(shí)，還應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。 碳水化合物 碳水化合物是細(xì)胞生長(zhǎng)主要能量來(lái)源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。 無(wú)機(jī)鹽 培養(yǎng)液中無(wú)機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過(guò)提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素, 細(xì)胞通常可耐受260mOsm/kg −320 mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES 時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。 |
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