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ELISA試劑盒?問題分析
點擊次數:1238 更新時間:2016-07-25

ELISA試劑盒?問題分析
1. 基因工程抗原與合成肽抗原的區別
1.1 基因工程抗原是抗原基因在質粒載體中原核或真核表達的蛋白質抗原,多以大腸桿菌或酵母菌為表達系統。該類抗原與合成肽相比具有以下特點:
a.分子量大。合成肽采用化學方法制備,由于工藝的局限,合成數量有限,只能達到數百個氨基酸;而利用基因工程制備的抗原,分子量更大。
b.穩定性好。包被的抗原的穩定性可使試劑盒的效期得到保證,早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只有3-4 個月,采用基因工程抗原后效期大大延長了。
c.基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達,
ELISA試劑盒表達產物包含更多的抗原決定簇,可提高試劑盒的靈敏度,提高檢出率。
d.純化難度大。基因工程抗原的純化技術難度較大。
1.2 合成多肽抗原是根據蛋白質抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。合成肽抗原有以下特點:
a.分子量太小
b.一般只含有一個抗原決定簇
c.純度高
d.穩定性差
由于基因工程抗原較于合成肽抗原有*的*性,ELISA試劑盒診斷試劑經歷了從合成肽向基因工程抗原的過渡。就HCV ELISA 試劑盒來講,*代產品為合成肽抗原,主要是HCV 特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽,只是當時的基因工程抗原不全,僅包括了HCV 的核心區片段;第三代產品基本上采用了基因工程抗原,而且這些抗原包括更多、更穩定、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代試劑的敏感度大大提高了。
由于歷史的原因,人們往往以反應本底的好壞來衡量ELISA 反應試劑盒,因此有些為了保持較好的本底采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被,該類試劑盒的流行病學敏感度不夠,穩定性也成問題。值得欣慰的是也有ELISA試劑盒堅持試劑盒高的流行病學敏感度,科學得對待反應結果。
2.假陽性本底產生的原因
2. 抗原因素
2.1. 融合蛋白對基因工程抗原特異性的影響。以丙肝診斷試劑盒為例為例,因為包被的基因工程抗原為融合蛋白,ELISA試劑盒包含了來自表達載體的一些序列,因此可以與血清中抗大腸桿菌的因子發生反應而產生了可疑標本。

 

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