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ELISA試劑盒酶標(biāo)抗體的量
點(diǎn)擊次數(shù):865 更新時(shí)間:2016-08-10

過碘酸鹽氧化法:本法只適用于含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的標(biāo)記常用此法。反應(yīng)時(shí),過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基很活潑,可與蛋白質(zhì)上的氨基形成Schiff氏堿而結(jié)合。酶標(biāo)記物按克分子比例聯(lián)結(jié),其比例為:酶/抗體=1-2/1。此法簡便有效,一般認(rèn)為是HRPzui可取的標(biāo)記方法,但也有人認(rèn)為所有試劑較為強(qiáng)烈,各批實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易重演。 按以上方法制備的酶結(jié)合物一般都混有未結(jié)合物的酶和。理論上,結(jié)合物中混有的游離酶一般不影響ELISA中zui后的酶活性測定,因經(jīng)過*洗滌,游離酶可被除去,并不影響zui終的顯色。ELISA試劑盒但游離的抗體則不同,它會(huì)與酶標(biāo)抗體競爭相應(yīng)的固相抗原,從而減少了結(jié)合到固相上的酶標(biāo)抗體的量。
 ELISA試劑盒中常用的酶一般都用此法交聯(lián)。它具有操作簡便、有效(結(jié)合率達(dá)60%-70%)和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是交聯(lián)反應(yīng)是隨機(jī)的,酶與抗體交聯(lián)時(shí)分子間的比例不嚴(yán)格,結(jié)合物的大小也不均一,酶與酶,抗體與抗體之間也有可能交聯(lián),影響效果。諏講椒ㄖ校?br> 先將酶與戊二醛作用,透析除去多余的戊二醛后,再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體。ELISA試劑盒也可先將抗體與戊二醛作用,再與酶聯(lián)結(jié)。兩步法的產(chǎn)物中絕大部分的酶與蛋白質(zhì)是以1:1的比例結(jié)合的,較一步法的酶結(jié)合物更有助于本底的改善以提高敏感度,但其偶聯(lián)的有效率較一步法低。 

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