提取得到RNA溶液后,我們需要對RNA進行相關的質量檢測,以確 定它是否符合后續實驗的要求。RNA用于不同的后續實驗,對其質 量要求不盡相同。cDNA文庫構建要求RNA完整且無酶等抑制物殘 留;Northern blot實驗對RNA完整性要求較高,對酶反應抑制物殘 留要求較低;RT-PCR實驗對RNA完整性要求不太高,但對酶反應 抑制物殘留要求嚴格。因此在進行不同的實驗時應選擇不同的方法 純化RNA,以達的實驗效果。 RNA得率檢測——分光光度計法 RNA得率有很強的組織特異性,不同組織RNA的豐度和RNA提取的 難易程度共同決定了該種組織的RNA得率。一般來說,可通過分光 光度計測定RNA溶液在260nm處的吸光值來計算RNA的含量。RNA 溶液在260、320、230、280nm下的吸光度分別代表了核酸、溶液 渾濁度、雜質(多肽、苯酚等)濃度和蛋白等有機物的吸收值。用標 準樣品測得在波長260nm處,1μg/ml RNA鈉鹽吸光度為0.025(光 程為1cm),即OD260=1時,樣品中RNA濃度為40μg/ml。通常分光 光度計OD260的讀數要介于0.15-1.0之間才是可靠的,因此RNA提 取結束后,要根據大概產量稀釋到適當濃度范圍,再用分光光度計 |