標本因素對ELISA測定的影響討論
血清是zui常用的ELISA標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源性物質和外源性物質兩種：
1． 內源性物質 有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig （s）抗體、交叉反應物質和其它物質等。
（1）類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽性。
解決該情況的辦法是：
①用F（ab）2替代完整的IgG；
②標本用聯有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗原時，可以用等加入到標本稀釋液中，使RF降解。
（2）補體 ELISA系統中固相一抗和標記二抗過程中，抗體分子發生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig （s） 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig （s） ，但加入量不足或亞類不同時無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。
（5）醫源性誘導的抗鼠Ig （s） 抗體 臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術，均有可能使這些病人體內產生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠Ig （s） 抗體。這些病人ELISA測定時均可產生假陽性。解決的辦法是：測定抗原時，在標本中加入足量的正常鼠Ig （s） ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。 |
