ELISA試驗與操作使用 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體，ELISA試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。因為其試劑不亂、易保留，操縱簡便，結(jié)果判定較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢修的各領(lǐng)域中。然而，影響ELISA試驗結(jié)果的因素良多，故加強(qiáng)各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分施展其方法學(xué)的長處。ELISA試驗是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實驗診斷方法。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記，此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。因為酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。在測定時，受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既留存其免疫學(xué)活性，又留存酶的活性。 操作注意事項：
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。 2． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。 3． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 4． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。 5． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。 7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。 8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。 9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。 |
