其他elisa試劑盒牛、豬組織中頭孢噻呋殘留檢測方法 1、安全要求 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)穿工作服、戴口罩和手套；提取和凈化操作都應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，避免溶劑氣體吸人和皮膚接觸；廢棄的化學(xué)試劑收集到容器中集中處理。 2、急救措施 皮膚接觸到有機(jī)溶劑或酸、堿溶液后用清水清洗，有機(jī)溶劑或酸、堿溶液濺入眼中用清水灌洗。 3、適用范圍 其他elisa試劑盒該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程適用于豬、牛的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟中頭孢噻呋殘留量檢測。 4、職責(zé) 進(jìn)行該項(xiàng)檢驗(yàn)的檢驗(yàn)員必須按該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢驗(yàn)，質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)監(jiān)督該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的正確執(zhí)行。 5、檢測原理 試料中殘留的頭孢噻呋，用二硫赤蘚醇(DTE)溶液提取，使頭孢噻呋及去呋喃甲酰頭孢噻呋(DFC)有關(guān)代謝物從蛋白或含硫化合物中分離，產(chǎn)生DFC。DFC與碘乙酰胺反應(yīng)，生成穩(wěn)定的DFC乙酰胺衍生物(DCA)，原形藥或代謝物均轉(zhuǎn)化為DCA衍生物。用C18固相萃取柱對衍生物進(jìn)行提取。強(qiáng)陰離子交換SAX)柱純化，再用強(qiáng)陽離子交換(SCX)柱凈化。DCA衍生物用液相色譜一紫外法測定，外標(biāo)法定量。 6、方法靈敏度 本方法在牛肝臟組織中的定量限為500μg/kg，其他組織的定量限為100μg/kg。 7、注意事項(xiàng) 除特別說明外，淋洗和洗脫過程中應(yīng)避免萃取柱柱床干涸。 8、材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求 除特別注明外，以下所用試劑均為分析純；水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。 8.1對照品、試劑和藥物儲備液、工作液準(zhǔn)備 8.1.1頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)品以C19H17N5O7S3計(jì)，含量≥87.5％ 8.1.2二硫赤蘚醇(DTE) 99％ 8.1.3磷酸85％ 8.1.4氯化 8.1.5氫氧化鉀 8.1.6硼酸鉀 8.1.7氯化鈉 8.1.8碘乙酰胺97％ 8.1.9無水氯化鈣 8.1.10磷酸二氫 8.1.11冰醋酸 8.1.12氫氧化鈉 8.1.13三(TFA) 99％ 8.1.14乙腈色譜純 8.1.15甲醇色譜純 8.1.16 0.05M硼酸緩沖液(pH值約為9) 稱取硼酸19g和KCl 3.7g，加水溶解并稀釋至1000mL。 8.1.17 0.025M磷酸鹽緩沖液(pH值7) 稱取KH2PO43.4g，加水溶解并稀釋至1000 mL。用45％KOH溶液調(diào)pH值至7。 8.1.18提取液(0.4％) 將lg DTE溶于250mL硼酸緩沖液中，每天制備。 8.1.19碘乙酰胺溶液(14％) 將7g碘乙酰胺溶于50mL磷酸鹽緩沖液中，每天制備。 8.1.20 0.01M NaOH溶液 取NaOH飽和溶液0.52mL，加水稀釋至1000mL。 8.1.21 0.1M氯化鈉溶液 稱取NaCl 5.9g，加水溶解并稀釋至1000mL。 8.1.22 0.1M CaCl2溶液 稱取CaCl2 11.1g，加水溶解并稀釋至1000mL。 8.1.23 25％磷酸溶液 取磷酸25mL，加水稀釋至100mL。 8.1.24 5％醋酸溶液 取醋酸5mL，加水稀釋至100mL。 8.1.25 C18柱洗脫液 乙腈：水(15：85) 8.1.26 SAX柱預(yù)洗液 甲醇：0.1M NaCl溶液(25：75) 8.1.27 SAX柱洗脫液 乙腈：5％醋酸溶液(5：95) 8.1.28 SCX柱預(yù)洗液 甲醇：0.1M CaCl2溶液(25：75) 8.1.29 SCX柱洗脫液 乙腈：0.1M NaCl溶液(5：95) 8.1.30 氫氧化鉀溶液(45％) 稱取KOH 45g，加水溶解并稀釋至100mL。 8.1.31 HPLC流動(dòng)相 流動(dòng)相A(0.1％TFA水溶液) 取lmL三氟乙，加水至1000mL。 流動(dòng)相B(0.1％TFA乙腈溶液) 取1mL三氟乙，加乙腈至1000mL。 8.1.32頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100μg／mL) 其他elisa試劑盒準(zhǔn)確稱量約11.2mg鹽酸頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)品，于100mL量瓶中，用0.025M磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，配成濃度為100μg/mL的貯備液。將貯備液移至冷藏安全瓶中，在一20％貯藏，有效期6個(gè)月。 8.1.33頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)工作液(10.0μg /mL) 取5mL頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于50mL量瓶中，用0.025M磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，即得。 8.1.34系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備 分別精密吸取100μg／mL頭孢噻呋標(biāo)準(zhǔn)工作液0.06mL、0.5mL、1.0mL、3.0mL、6.0mL、10.0mL至10mL容量瓶中，用0.025M磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，配成0.06μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、3.0μg/mL、6.0μg/mL、10.0μg /mL的系列工作液。 8.2儀器和設(shè)備 8.2.1 液相色譜儀(配紫外檢測器) 8.2.2組織勻漿機(jī) 8.2.3分析天平感量0.000 01g 8.2.4天平 感量0.01g 8.2.5渦旋混合器 8.2.6恒溫水浴振蕩器 8.2.7高速離心機(jī) 8.2.8酸度計(jì) 8.2.9離心管 50mL 8.2.10 c1 8固相萃取柱l g/6mL Varian BondElut@ 8.2.11 SAX固相萃取柱500mg/10mL Varian BondElut@ 8.2.12 SCX固相萃取柱100mg/10mL Varian BondElut@ 8.2.13 微孔濾膜孔徑0.45μm |
