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其他elisa試劑盒牛、豬組織中頭孢噻呋殘留檢測方法
點擊次數:1163 更新時間:2017-01-03

其他elisa試劑盒牛、豬組織中頭孢噻呋殘留檢測方法

1、安全要求

實驗操作時穿工作服、戴口罩和手套;提取和凈化操作都應在通風櫥中進行,避免溶劑氣體吸人和皮膚接觸;廢棄的化學試劑收集到容器中集中處理。

2、急救措施

皮膚接觸到有機溶劑或酸、堿溶液后用清水清洗,有機溶劑或酸、堿溶液濺入眼中用清水灌洗。

3、適用范圍

其他elisa試劑盒該標準操作規程適用于豬、牛的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟中頭孢噻呋殘留量檢測。

4、職責

進行該項檢驗的檢驗員必須按該標準操作規程進行檢驗,質量監督員負責監督該標準操作規程的正確執行。

5、檢測原理

試料中殘留的頭孢噻呋,用二硫赤蘚醇(DTE)溶液提取,使頭孢噻呋及去呋喃甲酰頭孢噻呋(DFC)有關代謝物從蛋白或含硫化合物中分離,產生DFC。DFC與碘乙酰胺反應,生成穩定的DFC乙酰胺衍生物(DCA),原形藥或代謝物均轉化為DCA衍生物。用C18固相萃取柱對衍生物進行提取。強陰離子交換SAX)柱純化,再用強陽離子交換(SCX)柱凈化。DCA衍生物用液相色譜一紫外法測定,外標法定量。

6、方法靈敏度

本方法在牛肝臟組織中的定量限為500μg/kg,其他組織的定量限為100μg/kg。

7、注意事項

除特別說明外,淋洗和洗脫過程中應避免萃取柱柱床干涸。

8、材料、儀器、試劑的準備及基本要求

除特別注明外,以下所用試劑均為分析純;水為符合GB/T6682規定的一級水。

8.1對照品、試劑和藥物儲備液、工作液準備

8.1.1頭孢噻呋標準品以C19H17N5O7S3計,含量≥87.5%

8.1.2二硫赤蘚醇(DTE) 99%

8.1.3磷酸85%

8.1.4氯化

8.1.5氫氧化鉀

8.1.6硼酸鉀

8.1.7氯化鈉

8.1.8碘乙酰胺97%

8.1.9無水氯化鈣

8.1.10磷酸二氫

8.1.11冰醋酸

8.1.12氫氧化鈉

8.1.13三(TFA) 99%

8.1.14乙腈色譜純

8.1.15甲醇色譜純

8.1.16 0.05M硼酸緩沖液(pH值約為9) 稱取硼酸19g和KCl 3.7g,加水溶解并稀釋至1000mL。

8.1.17 0.025M磷酸鹽緩沖液(pH值7) 稱取KH2PO43.4g,加水溶解并稀釋至1000

mL。用45%KOH溶液調pH值至7。

8.1.18提取液(0.4%) 將lg DTE溶于250mL硼酸緩沖液中,每天制備。

8.1.19碘乙酰胺溶液(14%) 將7g碘乙酰胺溶于50mL磷酸鹽緩沖液中,每天制備。

8.1.20 0.01M NaOH溶液 取NaOH飽和溶液0.52mL,加水稀釋至1000mL。

8.1.21 0.1M氯化鈉溶液 稱取NaCl 5.9g,加水溶解并稀釋至1000mL。

8.1.22 0.1M CaCl2溶液 稱取CaCl2 11.1g,加水溶解并稀釋至1000mL。

8.1.23 25%磷酸溶液 取磷酸25mL,加水稀釋至100mL。

8.1.24 5%醋酸溶液 取醋酸5mL,加水稀釋至100mL。

8.1.25 C18柱洗脫液 乙腈:水(15:85)

8.1.26 SAX柱預洗液 甲醇:0.1M NaCl溶液(25:75)

8.1.27 SAX柱洗脫液 乙腈:5%醋酸溶液(5:95)

8.1.28 SCX柱預洗液 甲醇:0.1M CaCl2溶液(25:75)

8.1.29 SCX柱洗脫液 乙腈:0.1M NaCl溶液(5:95)

8.1.30 氫氧化鉀溶液(45%) 稱取KOH 45g,加水溶解并稀釋至100mL。

8.1.31 HPLC流動相

流動相A(0.1%TFA水溶液) 取lmL三氟乙,加水至1000mL。

流動相B(0.1%TFA乙腈溶液) 取1mL三氟乙,加乙腈至1000mL。

8.1.32頭孢噻呋標準儲備液(100μg/mL)

其他elisa試劑盒準確稱量約11.2mg鹽酸頭孢噻呋標準品,于100mL量瓶中,用0.025M磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度,配成濃度為100μg/mL的貯備液。將貯備液移至冷藏安全瓶中,在一20%貯藏,有效期6個月。

8.1.33頭孢噻呋標準工作液(10.0μg /mL)

取5mL頭孢噻呋標準儲備液,于50mL量瓶中,用0.025M磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度,即得。

8.1.34系列濃度標準工作溶液的制備

分別精密吸取100μg/mL頭孢噻呋標準工作液0.06mL、0.5mL、1.0mL、3.0mL、6.0mL、10.0mL至10mL容量瓶中,用0.025M磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度,配成0.06μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、3.0μg/mL、6.0μg/mL、10.0μg /mL的系列工作液。

8.2儀器和設備

8.2.1 液相色譜儀(配紫外檢測器)

8.2.2組織勻漿機

8.2.3分析天平感量0.000 01g

8.2.4天平 感量0.01g

8.2.5渦旋混合器

8.2.6恒溫水浴振蕩器

8.2.7高速離心機

8.2.8酸度計

8.2.9離心管 50mL

8.2.10 c1 8固相萃取柱l g/6mL Varian BondElut@

8.2.11 SAX固相萃取柱500mg/10mL Varian BondElut@

8.2.12 SCX固相萃取柱100mg/10mL Varian BondElut@

8.2.13 微孔濾膜孔徑0.45μm

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