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動物免疫操作技術分析
點擊次數:989 更新時間:2017-02-07

動物免疫操作技術分析

免疫原用無菌鹽水稀釋并與佐劑混合,腹腔注射抗原與佐劑*混勻后形成的穩定乳狀液,大鼠elisa試劑盒在免疫原提供持續的免疫應答基礎上進行加強免疫

周期 第1天 采血0.2ml(獲得0.1ml免疫前血清)

*次免疫(抗原加弗氏*佐劑)

第14天 第二次免疫(抗原加弗氏不*佐劑)

第21天 采血和ELISA檢測

第35天 第三次免疫(抗原加弗氏不*佐劑)

第42天 采血和ELISA檢測

第56天 第四次免疫(抗原溶于PBS或鹽水)

第61天 細胞融合

大鼠elisa試劑盒操作方法

(1)小鼠腹水用冷PBS液稀釋4倍后,于1.00×105轉離心30min,去沉淀。

(2)在4℃于上清中緩緩滴加飽和硫酸銨液,邊加邊攪拌,使溶液zui終為50%硫酸銨濃度。

(3)此溶液置冰中30min~60min,然后5000r/min離心10min,去上清。

(4)將沉淀溶于Tris-HCl緩沖液(40mMol/LNaCl)中(溶液可能混濁)。

(5)裝入透析袋于Tris-HCl緩沖液(20mMol/LNaCl)中透析除鹽。

(6)離心去沉淀。 (7)溶液稀釋(1:100或更高倍稀釋)后,于280nm測蛋白含量,估計蛋白質含量1A280unit=0.8mg蛋白質一般每ml腹水中,含有總蛋白約25mg~36mg。

(8)過DEAE—纖維素柱:纖維素柱高40cm,以20mMol/LNaClTris緩沖液平衡。大鼠elisa試劑盒透析樣品以Tris緩沖液等量稀釋。

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