動物免疫操作技術分析 免疫原用無菌鹽水稀釋并與佐劑混合,腹腔注射抗原與佐劑*混勻后形成的穩定乳狀液,大鼠elisa試劑盒在免疫原提供持續的免疫應答基礎上進行加強免疫 周期 第1天 采血0.2ml(獲得0.1ml免疫前血清) *次免疫(抗原加弗氏*佐劑) 第14天 第二次免疫(抗原加弗氏不*佐劑) 第21天 采血和ELISA檢測 第35天 第三次免疫(抗原加弗氏不*佐劑) 第42天 采血和ELISA檢測 第56天 第四次免疫(抗原溶于PBS或鹽水) 第61天 細胞融合 大鼠elisa試劑盒操作方法 (1)小鼠腹水用冷PBS液稀釋4倍后,于1.00×105轉離心30min,去沉淀。 (2)在4℃于上清中緩緩滴加飽和硫酸銨液,邊加邊攪拌,使溶液zui終為50%硫酸銨濃度。 (3)此溶液置冰中30min~60min,然后5000r/min離心10min,去上清。 (4)將沉淀溶于Tris-HCl緩沖液(40mMol/LNaCl)中(溶液可能混濁)。 (5)裝入透析袋于Tris-HCl緩沖液(20mMol/LNaCl)中透析除鹽。 (6)離心去沉淀。 (7)溶液稀釋(1:100或更高倍稀釋)后,于280nm測蛋白含量,估計蛋白質含量1A280unit=0.8mg蛋白質一般每ml腹水中,含有總蛋白約25mg~36mg。 (8)過DEAE—纖維素柱:纖維素柱高40cm,以20mMol/LNaClTris緩沖液平衡。大鼠elisa試劑盒透析樣品以Tris緩沖液等量稀釋。 |