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人elisa試劑盒緩沖液的制備 |
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點擊次數:971 更新時間:2017-05-25 |
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人elisa試劑盒緩沖液是一種能在加入少量酸或堿時抵抗pH改變的溶液。PH緩沖系統對維持生物的正常pH值,正常生理環境起重要作用。多數細胞僅能在很窄的pH范圍內進行活動,而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩沖體系,它們時蛋白質、重碳酸鹽緩沖體系。每種緩沖體系所占的分量在各類細胞和器官中是不同的。 由弱酸及其鹽組合一起使具有緩沖作用。生化實驗室常常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris(三羥甲基氨基甲烷)等系統,在生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因為有時影響實驗結果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產生不需要的反應。 硼酸鹽:硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖。 檸檬酸鹽:檸檬酸鹽離子容易與鈣結合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用。 磷酸鹽:在有些實驗,它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物,重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在pH7.5以上時緩沖能力很小。 三羥甲基氨基甲烷:它可以和重金屬一起作用,但在有些系統中也起抑止的作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視,在室溫pH是7.8的Tris一緩沖液,在4℃時是8.4,在37℃時是7.4,因此,4℃配制的緩沖液拿到37℃測量時,其氫離子濃度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下,緩沖能力很差。 緩沖液的pH值由哪些因素決定? 設緩沖系統的弱酸的電離常數為K(平衡常數),平衡時弱酸的濃度為[酸],弱酸鹽的濃度為[鹽],則由弱酸的電離平衡式可得下式: 人elisa試劑盒根據此式可得出下列幾點結論: (1)緩沖液的pH值與該酸的電離平衡常數K及鹽和酸的濃度有關。弱酸一定,但酸和鹽的比例不同時,可以得到不同的pH值。當酸和鹽濃度相等時,溶液的pH值與PK值相同。 (2)酸和鹽濃度等比例也增減時,溶液的pH值不便。 (3)酸和鹽濃度相等時,緩沖液的緩沖效率為zui高,比例相差越大,緩沖效率越低,一般地說緩沖液有效緩沖范圍為PK±1pH。 從上述可知,只要知道緩沖對的PK值,和要配制的緩沖液的pH值(及要求的緩沖液總濃度)時,可按公式計算出[鹽]和[酸]的量。這樣算涉及到對數的換算,較麻煩,前人為減少后人的計算麻煩,經計算已為我們總結出pH值與緩沖液對離子用量的關系列出了表格。講義附錄部分節錄有磷酸緩沖液的配制表。只要我們知道要配制的緩沖液的pH,經查表便可計算處所用緩沖劑的比例和用量。例如配制500nmpH5.8濃度為0.1M磷酸緩沖液。 經查表知pH5.8濃度為0.2M Na2HPO48.0毫升,而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推論出配制100ml0.1M的磷酸緩沖液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。 所以500ml 0.1M磷酸緩沖液需要Na2HPO4量為: 需Na2HPO4量為 : 計算好后,按計算結果稱好藥品,放于燒杯中,加少量蒸餾水溶解,轉移入50ml容量瓶,加蒸餾水至刻度,搖勻,便得所需的緩沖液。 人elisa試劑盒各種緩沖溶液的配制,均按下表按比例混合,某些試劑,必須標定配成準確的濃度才能進行,如醋酸、NaOH等。 |
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