其他elisa試劑盒方法原理 一、雙抗體夾心法測(cè)定抗原 1.將抗原免疫種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面; 2.加抗原,形成抗原-抗體復(fù)合物; 3.加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復(fù)合物; 4.加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體); 5.加底物。底物的降解量=抗原量。 二、直接法測(cè)定抗原 1.將抗原吸附在載體表面; 2.加酶標(biāo)抗體,形成抗原—抗體復(fù)合物; 3.加底物。底物的降解量=抗原量。 三、間接法測(cè)定抗體 1.將抗原吸附于固相載體表面; 2.加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物; 3.加酶標(biāo)抗體; 4加底物。 測(cè)定底物的降解量=抗體量。 其他elisa試劑盒操作注意 1. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 2.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。 3.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。 4.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。 5.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。 6.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 7.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。 8.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 9.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。 10.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。 11.加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。 12.按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。 ◎ELISA試劑盒質(zhì)控分析 1.人員培訓(xùn)內(nèi)容包括:①檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理(ELISA試劑盒原理);②熟悉檢測(cè)技巧,了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn);熟悉檢測(cè)試劑性能(包括試劑盒組成,包被片段及其組成);③熟悉檢測(cè)儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識(shí);④某些特殊項(xiàng)目的檢測(cè)如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班,考試合格后持證上崗。 2.基本了解 ① 1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。 ② 特點(diǎn):ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。 ③ 酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì),進(jìn)行信號(hào)放大; ④ 有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過(guò)程; ⑤ 靈敏度特異性相對(duì)較高。 ⑥ 局限性:只能檢測(cè)到ng水平 ⑦ 精密度差(批內(nèi)CV15-20%); ⑧ 線性范圍窄(一個(gè)數(shù)量級(jí)); ⑨ |