引起小鼠elisa試劑盒測定錯誤結(jié)果的原因主要有:①標本因素;②試劑因素;③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。 (1)類風濕因子 人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與雞ELISA試劑盒系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。ELISA試劑盒解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。 (2)補體 小鼠elisa試劑盒系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。 (3)嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將雞ELISA試劑盒系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時無效。 (4)嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原。為避免以上情況出現(xiàn),小鼠elisa試劑盒解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。 |