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其他elisa試劑盒如何選擇層析方法 |
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點擊次數:1060 更新時間:2017-07-25 |
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其他elisa試劑盒選擇層析方法 在對目標蛋白的特性或樣品成分不太了解,可嘗試幾種不同的純化方法: 一、使用zui通用的凝膠過濾方法,選擇分離范圍廣泛的介質如Superose、Sephacryl HR根據分子量將樣品分成不同組份。 二、用含專一配體或抗體的親和層析介質結合目標蛋白。也可用各種活化偶聯介質偶聯目標蛋白的底物、受體等自制親和介質,再用以結合目標蛋白。一部即可得到高純度樣品。 三、大體積的樣品、常使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品,可再用疏水層析純化。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理,洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析。兩種方法常被交替使用于純化流程中。 純化大量粗品 處理大量原液時,為避免堵塞柱子,一般使用Sepharose Big Beads、SepharoseXL、Sepharose Fast Flow等大顆粒離子交換介質。擴張柱床吸附技術利用多種STREAMLINE截止,直接從含破碎細胞或組織萃取物的發酵液中俘獲蛋白。將離心、超濾、初純化結合為一,提高回收率,縮短純化周期。 純化硫酸氨樣品 硫酸氨沉淀方法常被用來初步凈化樣品,經處理過的樣本處于高鹽狀態下,很適合直接上疏水層析。若作離子交換,先用HiTrap HIC Test Kit和RESOURCE HIC Test KIT可在八種疏水介質中選擇介質及zuih 的純化條件。低鹽洗脫的樣品可稍加稀釋或直接上其他吸附性層析。 其他elisa試劑盒純化糖類分子 固化外源凝集素如刀豆球蛋白、花生、大麥等的凝集素,結合碳水化合物的糖類殘基,很適合用作分離糖化細胞膜組分、細胞、甚至亞細胞細胞器,純化糖蛋白等。附上外源凝集素的Sepharose 6MB親和層析介質,可俘獲整個細胞或大復合物,如膜囊等。 純化膜蛋白 膜蛋白分離長使用去污劑使其保持活性。離子性去污劑應選用與目標蛋白電荷相反者,以避免在作離子交換時蛋白競爭交換介質,藉此除去去污劑。非離子性去污劑可用疏水層析法除去。 純化單抗、抗原 單抗多為IgG,來源主要是腹水和混合瘤培養上清夜。腹水有大量白蛋白、轉鐵蛋白和宿主抗體等。Protein G和ProteinA對IgG的Fc區有專一性親和作用,能一步醇化各種不同源的IgG。血清互補劑如小牛血清可先用蛋白G預處理,在培養前除去IgG。重組蛋白A介質rProtein A Sepharose FF對IgG有更高的栽量和專一性,基團脫落更少。脫落的rProtein A用離子交換Q Sepharose Hp或凝膠過濾Superdex 200,很容易去除。 疏水層析pheny1 Sepharose HP也很適合純化IgG。宿主抗體和污染IgG可用凝膠過濾Superdex 200在精細純化中去除。 純化IgG抗原zui有效的方法是用活化偶聯介質如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶聯IgG,再進一步獲取IgG抗原。 HiTrap IgM是用來純化融合瘤細胞培養的單抗IgM,結合量達5mg IgM。HiTrap IgY是專門用來從蛋清里純化IgY,其他elisa試劑盒結合量達100 mg純IgY。 |
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