其他elisa試劑盒選擇層析方法
在對(duì)目標(biāo)蛋白的特性或樣品成分不太了解，可嘗試幾種不同的純化方法：
一、使用zui通用的凝膠過(guò)濾方法，選擇分離范圍廣泛的介質(zhì)如Superose、Sephacryl HR根據(jù)分子量將樣品分成不同組份。
二、用含專一配體或抗體的親和層析介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)蛋白。也可用各種活化偶聯(lián)介質(zhì)偶聯(lián)目標(biāo)蛋白的底物、受體等自制親和介質(zhì)，再用以結(jié)合目標(biāo)蛋白。一部即可得到高純度樣品。
三、大體積的樣品、常使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品，可再用疏水層析純化。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理，洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析。兩種方法常被交替使用于純化流程中。
純化大量粗品
處理大量原液時(shí)，為避免堵塞柱子，一般使用Sepharose Big Beads、SepharoseXL、Sepharose Fast Flow等大顆粒離子交換介質(zhì)。擴(kuò)張柱床吸附技術(shù)利用多種STREAMLINE截止，直接從含破碎細(xì)胞或組織萃取物的發(fā)酵液中俘獲蛋白。將離心、超濾、初純化結(jié)合為一，提高回收率，縮短純化周期。
純化硫酸氨樣品
硫酸氨沉淀方法常被用來(lái)初步凈化樣品，經(jīng)處理過(guò)的樣本處于高鹽狀態(tài)下，很適合直接上疏水層析。若作離子交換，先用HiTrap HIC Test Kit和RESOURCE HIC Test KIT可在八種疏水介質(zhì)中選擇介質(zhì)及zuih 的純化條件。低鹽洗脫的樣品可稍加稀釋或直接上其他吸附性層析。
其他elisa試劑盒純化糖類分子
固化外源凝集素如刀豆球蛋白、花生、大麥等的凝集素，結(jié)合碳水化合物的糖類殘基，很適合用作分離糖化細(xì)胞膜組分、細(xì)胞、甚至亞細(xì)胞細(xì)胞器，純化糖蛋白等。附上外源凝集素的Sepharose 6MB親和層析介質(zhì)，可俘獲整個(gè)細(xì)胞或大復(fù)合物，如膜囊等。
純化膜蛋白
膜蛋白分離長(zhǎng)使用去污劑使其保持活性。離子性去污劑應(yīng)選用與目標(biāo)蛋白電荷相反者，以避免在作離子交換時(shí)蛋白競(jìng)爭(zhēng)交換介質(zhì)，藉此除去去污劑。非離子性去污劑可用疏水層析法除去。
純化單抗、抗原
單抗多為IgG，來(lái)源主要是腹水和混合瘤培養(yǎng)上清夜。腹水有大量白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和宿主抗體等。Protein G和ProteinA對(duì)IgG的Fc區(qū)有專一性親和作用，能一步醇化各種不同源的IgG。血清互補(bǔ)劑如小牛血清可先用蛋白G預(yù)處理，在培養(yǎng)前除去IgG。重組蛋白A介質(zhì)rProtein A Sepharose FF對(duì)IgG有更高的栽量和專一性，基團(tuán)脫落更少。脫落的rProtein A用離子交換Q Sepharose Hp或凝膠過(guò)濾Superdex 200，很容易去除。
疏水層析pheny1 Sepharose HP也很適合純化IgG。宿主抗體和污染IgG可用凝膠過(guò)濾Superdex 200在精細(xì)純化中去除。
純化IgG抗原zui有效的方法是用活化偶聯(lián)介質(zhì)如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶聯(lián)IgG，再進(jìn)一步獲取IgG抗原。
HiTrap IgM是用來(lái)純化融合瘤細(xì)胞培養(yǎng)的單抗IgM，結(jié)合量達(dá)5mg IgM。HiTrap IgY是專門用來(lái)從蛋清里純化IgY，其他elisa試劑盒結(jié)合量達(dá)100 mg純IgY。 |
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