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影響小鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果的兩個(gè)因素
點(diǎn)擊次數(shù):905 更新時(shí)間:2017-09-14

小鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的結(jié)果影響主要有兩個(gè)因素,一個(gè)是試劑盒的因素,另一個(gè)便是操作因素。實(shí)驗(yàn)操作需要大家按要求操作,并積累經(jīng)驗(yàn)。針對(duì)選擇elisa試劑盒主要有以下兩點(diǎn):
一、根據(jù)實(shí)驗(yàn)室要求 
    一般Elisa檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶,而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外Elisa的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。
    單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于Elisa試劑盒,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。
    如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購(gòu)買源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行Elisa檢測(cè)時(shí),檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,來(lái)避免上述問題。 
二、根據(jù)Elisa類型
    雖然小鼠elisa試劑盒方法試劑盒有著多種類型,不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell Elisa和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell Elisa需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行Elisa實(shí)驗(yàn)。
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小鼠elisa試劑盒

 

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