在現在的小鼠elisa試劑盒商品試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。試劑的加入在國產試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出現重復滴加或加在兩孔之間的現象，這樣就會在孔內的非包被區出現非特異吸附，從而引起非特異顯色。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。四、溫育溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。
溫育這一步是臨床ELISA測定中。通常目前國內ELISA商品試劑盒的反應溫育時間為37℃30分鐘～1小時，進口ELISA試劑盒則通常為37℃1～2小時才能有較*的結合，低于1小時，可能會影響測定下限。因此，關于溫育，在實際測定操作中一定要注意以下幾點：要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。一般來說，加完樣本和/或反應試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內溫度從室溫升至37℃，需要一定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態下，這段升溫時間可能還比較長，而在臨床實驗室中，很少有人注意這個問題，通常是將微孔板一放入溫箱即開始計時，這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題，就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時間，在做HBsAg測定的室內質控中，測定由衛生部臨床檢驗中心供應的1ng/ml弱陽性樣本時，小鼠elisa試劑盒總是測不出來，不知原因為何？這可能就與南方冬天室內溫度較低有關，此時微孔板轉入溫箱后37℃溫育時間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性。 蛋白質精氨酸甲基轉移酶1IgG 兔子轉化生長因子β1(TGF-β1) 蛋白質酪氨酸激酶JAK-1IgG 兔子主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/RLAⅢ) 蛋白質酪氨酸激酶JAK-2IgG 兔子腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3) 蛋白質磷酸酶-2AIgG 兔子腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3) 蛋白質磷酸酶-2AIgG 兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α) 低分子量神經絲蛋白IgG 兔子中性粒彈性蛋白酶(NE) 低分子質量蛋白7IgG 兔子脂聯素(ADP) 低密度脂蛋白IgG 兔子脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2) 低密度脂蛋白受體IgG 兔子孕激素/孕酮(PROG) 低密度脂蛋白受體相關蛋白6IgG 兔子胰島素樣生長因子2(IGF-2)
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