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     在大鼠ELISA試劑盒操作中，我們都認為ELISA實驗的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結果的信噪比。

     常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩定，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會降低特異結合，產生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協助洗滌過程中的封閉。

     蛋白封閉液則有所不同，是*的。它們與開放位點結合并封閉，同時穩定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。