人骨形成蛋白-4(BMP-4)elisa測定試劑盒操作步驟 1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 120ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液 60ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液 30ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液 15ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液 7.5ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液 2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。 7.溫育：操作同3。 8.洗滌：操作同5。 9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘. 10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 |
