今天我公司技能專員特意為大家準備十幾條人ELISA試劑盒操作的要點細節，閱覽之后能夠總結一下您在實驗中有哪些要點被忽略掉了。酷愛ELISA實驗的新手們需留意這些細節： 1.不管是試劑盒，還是其它產品，在運用之前咱們都要仔細閱覽說明書。 2.相同的，一定要確定試劑盒是不是在有效期內。 3.按說明書確定一切試劑齊全(數量、體積)。 4.標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內無法實驗者，留意低溫保存。 5.ELISA實驗中為了確定*佳信號和背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在恰當規模內的規范品的系列稀釋。按試劑說明書常規供給的規模進行操作。 6.規范品的：關于每種細胞因子應仔細閱覽說明書，留意每批的細節。在運用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其間的細胞因子。依據每批說明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。 7.一般待測抗原規范曲線的線性規模的可通過將規范品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用規范的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改動酶底物體系可在一定規模內提高靈敏度。 8.依據檢測標本數量確定所需試劑的量。 9.按說明書將所用試劑平衡至室溫，所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技能攻略。 10.挑選抗體時挑選一個單抗和一個多抗進行配對；若挑選兩個單抗，有必要識別不同表位的抗體；從同一家公司挑選抗體對。 11.為了優化靈敏度，主張過夜孵育規范品和標本。 12.若運用過氧化物酶作為顯色體系，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。 13.當測定混合液體中的抗原時，如血清，主張在標本稀釋液中加不相干的Ig。 14.準備好一切實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。 |
