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足馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒操作使用方法
點擊次數:695 更新時間:2021-03-23

足馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒操作使用方法:
一、足馬杜拉分枝菌PCR檢測試劑盒供應商樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。

實驗前準備:

    1.標準品復溶:試劑盒提供6管標準品,每管已標定濃度,并且凍干。實驗前在每個標準品管中加入0.5mL樣本稀釋液,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動助其溶解,使其恢復為每個標準品管身標注的濃度。

    2. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。  

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