普氏立克次體(RP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)標準操作步驟：
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。
5.加入350μl，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，轉速（>13000×g）離心空結合柱1min以干燥柱子的基質；這一步對下面的洗脫步驟至關重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min； 15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。 產品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
黑人Burkitt淋巴瘤細胞；RAJI 人B淋巴細胞瘤細胞；RAMOS 人B淋巴細胞瘤細胞；RAMOS(RA.1) 人腦瘤細胞；SF126 人腦瘤細胞；SF763 人腦瘤細胞；SF767 人皮膚黑色素瘤細胞；SK-MEL-1 人腎上腺皮質癌細胞；SW-13 人結直腸癌細胞；T84 人急性單核細胞白血病細胞；THP-1 人神經膠質細胞瘤細胞；U251 人組織細胞淋巴瘤細胞；U937 [U-937] 人胃腺癌細胞；BGC-823 人低分化肺腺癌細胞；GLC-82 [GLC82] 人喉癌上皮細胞；Hep-2 人纖維肉瘤細胞；HT-1080 人絨癌細胞；JEG-3 人耐VP16絨癌細胞株；JEG-3/VP16 白介素-2轉染耐VP16絨癌細胞；JEG-3/VP16-IL-2 TNFa轉染耐VP16絨癌細胞；JEG-3-VP16-TNFa 人急性T淋巴細胞白血病細胞；Jurkat, Clone E6-1 人神經母細胞瘤細胞；BE(2)-M17 人乳腺癌細胞；MDA-MB-157 人成骨肉瘤細胞；MG-63 人小細胞肺癌細胞；NCI-H446 人多發性骨髓瘤細胞；RPMI-8226 [RPMI8826] 人腦瘤細胞；SF17
|
