人延伸蛋白A(EloA)ELISA試劑盒操作步驟： 1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘。 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs） MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞 MM, 小鼠小膠質(zhì)細胞 mCF, 小鼠心臟成纖維細胞 MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 細胞名稱 人絨毛膜毛細血管內(nèi)皮細胞 人羊膜上皮細胞 人絨毛間充質(zhì)成纖維細胞 人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞 人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞 細胞名稱 NRK-52E，大鼠腎細胞 H9c2大鼠心肌細胞（ATCC來源） NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs） HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系 CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系 COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞 SF9, 昆蟲卵巢細胞 BRL 3A, 大鼠肝正常細胞 HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞 HET-1A, 人食管上皮細胞 RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞 GC-1, 鼠精原細胞 293A，人胚腎上皮細胞系（腺病毒包裝級別） hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞 293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細胞系 EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細胞 HBE, 正常人支氣管上皮細胞系 HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細胞 HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞系 HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞 HAVSMC, 人主動脈平滑肌細胞
|
