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煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒標準操作步驟
點擊次數:432 更新時間:2024-04-22

煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒標準操作步驟:


1.液氮充分研磨樣品。


2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。


3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。


4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。


5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。


6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。


7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。


8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。


9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。


10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;


11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;


注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。


12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;


13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。


14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。


產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。


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