細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）人胚肝二倍體細胞；CCC-HEL-1圖片準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人胚肝二倍體細胞；CCC-HEL-1圖片
形態(tài)特性上皮細胞樣

生長特性貼壁生長

特征特性取材自引產(chǎn)的15周胚胎組織，中國醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所細胞資源中心建立。

培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)20%FBS

傳代方法1:3傳代；3~4天1次。

傳代情況P6

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測培養(yǎng)法（-）

STRAmelogenin：X，Y；CSF1PO：12；D13S317：8；D16S539：12；D18S51：13,20；D6S1043：12,18；D21S11：29,32.2；D2S1338：19，20,；D3S1358：14，15；D5S818：12,13；D7S820：10；D8S1179：13,14；FGA：21,23；PentaE：14,16；vWA：16；

同工酶

染色體46，XY

注意事項：
?1.一般客戶拿到人胚肝二倍體細胞；CCC-HEL-1圖片后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
PSA*小鼠前列腺特異性抗原規(guī)格48T/96T

PAP*小鼠前列腺酸性磷酸酶規(guī)格48T/96T

PGF*小鼠前列腺素F規(guī)格48T/96T

PGE2*小鼠前列腺素E2規(guī)格48T/96T

PGE1*小鼠前列腺素E1規(guī)格48T/96T

GIP*小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽規(guī)格48T/96T

ODF*小鼠破骨細胞分化因子規(guī)格48T/96T

CORT*小鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮規(guī)格48T/96T

Cortisol*小鼠皮質(zhì)醇規(guī)格48T/96T

M30*小鼠胚胎干細胞系MESPU30規(guī)格48T/96T
人胚肝二倍體細胞；CCC-HEL-1圖片Cecropin抗菌肽/天蠶素（多肽）0.5mgCecropin抗菌肽/天蠶素（多肽

c-erbB-2蛋白c-erbB-2蛋白（抗原）0.5mgc-erbB-2蛋白c-erbB-2蛋白（抗原

c-erbB-4癌基因抗原C-erbB-4/HER4/erbB-4(epidermalgrowthfactorreceptor4)c-erbB-4癌基因抗原0.5mgC-erbB-4/HER4/erbB-4(epidermalgrowthfactorreceptor4

Ceruloplasminpeptide銅藍蛋白抗原Ceruloplasminpeptide銅藍蛋白抗原0.5mgCeruloplasminpeptide銅藍蛋白抗原

抗原C-fos(immediateearlygene,ieg)即刻早期基因(是一種原癌基因)抗原0.5mgC-fos(immediateearlygene,ieg

囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子抗原CFTR(cysticfibrosistransmembraneconductanceregulator)囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子抗原0.5mgCFTR(cysticfibrosistransmembraneconductanceregulator

CG6856-PApeptideCG6856-PA抗原CG6856-PApeptideCG6856-PA抗原0.5mgCG6856-PApeptideCG6856-PA抗原

嗜鉻粒素A抗原CGA(ChromograninA)嗜鉻粒素A抗原0.5mgCGA(ChromograninA
冷凍保存細胞之方法：
人胚肝二倍體細胞；CCC-HEL-1圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。