細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）人髓母細胞瘤細胞；Daoy說明書準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人髓母細胞瘤細胞；Daoy說明書
形態(tài)特性多角

生長特性貼壁生長

特征特性該細胞是1985年由JacobsenPF建立的,源自一名4歲大的兒童的后顱窩腫瘤的活檢組織，未檢出神經(jīng)元和膠質(zhì)分化的特征；可用作轉(zhuǎn)染宿主。

培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

傳代方法1:4~1:6傳代；每周換液2~3次。

傳代情況C4

凍存條件基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測培養(yǎng)法（-）

STRAmelogenin：X；CSF1PO：11；D13S317：13，14；D16S539：10；D18S51：12；D19S433：14，14.2；D21S11：29，31.2；D2S1338：16，17；D3S1358：15；D5S818：11，13；D7S820：8，10；D8S1179：13，15；FGA：23；TH01：9；TPOX：8，10；vWA：14，20；

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到人髓母細胞瘤細胞；Daoy說明書后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
AHA*人抗組蛋白抗體規(guī)格48T/96T

H2A-H2B*人抗組蛋白規(guī)格48T/96T

EMAb*人抗子宮內(nèi)膜抗體規(guī)格48T/96T

ATA*人抗滋養(yǎng)膜細胞抗體規(guī)格48T/96T

ACA/CENP*人抗著絲點抗體規(guī)格48T/96T

ANGA*人抗中性粒細胞顆粒抗體規(guī)格48T/96T

ANA*人抗中性粒細胞抗體規(guī)格48T/96T

pANCA*人抗中性粒細胞核周抗體規(guī)格48T/96T

cANCA*人抗中性粒細胞胞漿抗體規(guī)格48T/96T

ACA*人抗中性粒/中心體抗體規(guī)格48T/96T
人髓母細胞瘤細胞；Daoy說明書Ubiquitin泛素蛋白Ubiquitin泛素蛋白0.5mgUbiquitin泛素蛋白

UCN(Urocortin)mouseret新型血管活性因子UCN抗原(小鼠、大鼠)0.5mgUCN(Urocortin

C端抗原URGCP/URG4(Up-regulatorofcellproliferation)Cterminal肝炎病毒X蛋白(HBxAg)C端抗原0.5mgURGCP/URG4(Up-regulatorofcellproliferation

抗原URGCP/URG4(Up-regulatorofcellproliferation)乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)抗原0.5mgURGCP/URG4(Up-regulatorofcellproliferation

上游刺激因子1抗原USF-1(upstreamstimulatoryfactor1)上游刺激因子1抗原0.5mgUSF-1(upstreamstimulatoryfactor1

G蛋白偶聯(lián)受體14抗原UTS2R/GPR14(UrotensinIIreceptor：GProteinCoupledReceptor14)G蛋白偶聯(lián)受體14抗原0.5mgUTS2R/GPR14(UrotensinIIreceptor：GProteinCoupledReceptor14

V5tag多肽抗原V5tag(recombinantV5-taggedprotein)V5tag多肽抗原0.5mgV5tag(recombinantV5-taggedprotein

VAP1(vascularadhesionprotein1)血管粘附蛋白1（多肽抗原）0.5mgVAP1(vascularadhesionprotein1
冷凍保存細胞之方法：
人髓母細胞瘤細胞；Daoy說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。