細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；CFPAC-1培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；CFPAC-1培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮細(xì)胞

生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)

特征特性CFPAC-1是胰腺管腺癌細(xì)胞系，建自26歲白人男性囊性纖維變性（CF）的肝轉(zhuǎn)移灶。該細(xì)胞系表達(dá)囊性纖維變性跨膜調(diào)節(jié)因子（CFTR）。

態(tài)為上皮樣且頂端微絨毛極化。該細(xì)胞表達(dá)胰腺管細(xì)胞特征性的細(xì)胞角蛋白和癌胚抗原。倍增時(shí)間為30-32小時(shí)。它是亞3倍體的細(xì)胞系，36％的細(xì)胞的染色體模式數(shù)為75。該細(xì)胞傳代至24代時(shí)在無(wú)胸腺小鼠中致瘤。

培養(yǎng)條件IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。4-5天長(zhǎng)滿。

傳代情況P(20+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測(cè)陰性

STRAmelogenin:X,Y；CSF1PO:10；D13S317:12；D16S539:9,11；D18S51:12；D19S433:13,15；D21S11:30,31.2；D2S1338:18,23；D3S1358:16；D5S818:10,11；D7S820:8,10；D8S1179:11,15；FGA:21,22；TH01:8；TPOX:8；vWA:17

同工酶

染色體

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；CFPAC-1培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*VTGELISAKit鯉魚(yú)卵黃蛋白原規(guī)格：96T

*GnRHELISAKit魚(yú)類促性腺激素釋放激素規(guī)格：48T

*FishTri-iodothyronine,T3ELISAKit魚(yú)類*狀腺原氨酸規(guī)格：48T

*FishCortisolELISAKit魚(yú)類皮質(zhì)醇規(guī)格：48T

*FishhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit魚(yú)類超敏C反應(yīng)蛋白規(guī)格：48T

*FishOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit魚(yú)骨鈣素/骨谷氨酸蛋白規(guī)格：48T

*Cheraxquadricarinatuslipovitellin/vitellin,Lv/VnELISAKit紅螯光殼螯蝦卵黃脂磷蛋白/卵黃磷蛋白規(guī)格：48T

*MacrobrachiumrosenbergiiNodavirus,MrNVELISAKit羅氏沼蝦諾達(dá)病毒規(guī)格：48T

*Cobravenomfactor,CVFELISAKit毒蛇因子規(guī)格：48T

*bullfroggrowthhormone,GHELISAKit牛蛙生長(zhǎng)激素規(guī)格：48T
人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；CFPAC-1培養(yǎng)*Anti-MMP-9基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-13基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-14基質(zhì)金屬蛋白酶-14抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-15基質(zhì)金屬蛋白酶-15抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-16基質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-20基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-17基質(zhì)金屬蛋白酶-17抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MMP-24基質(zhì)金屬蛋白酶-24抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MMP-26基質(zhì)金屬蛋白酶-26抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MMP-10基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗體規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞；CFPAC-1培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。