細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人骨肉瘤細(xì)胞；U-2 OS [U2OS；U2-OS；U-2OS]準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價(jià)，人骨肉瘤細(xì)胞；U-2 OS [U2OS；U2-OS；U-2OS]貨期短，價(jià)格優(yōu)，售后齊點(diǎn)擊進(jìn)入了解更多腫瘤細(xì)胞。

產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 人骨肉瘤細(xì)胞；U-2 OS [U2OS；U2-OS；U-2OS]
形態(tài)特性上皮細(xì)胞

生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)

特征特性J.PontenandE.這株細(xì)胞(原名2T)源自15歲女孩的脛骨中等分化的肉瘤。與WI-38共培養(yǎng)或CF檢測(cè)SV40，RSV或腺病毒時(shí)未檢測(cè)到病毒。1972年發(fā)現(xiàn)支原體污染并去除。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)熱滅活馬血清，10%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，5%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。

傳代情況PN5

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測(cè)陰性

STRAmelogenin:X；CSF1PO:13；D13S317:13；D16S539:11,12；D18S51:14；D19S433:15；D21S11:31；D2S1338:20,24；D3S1358:16；D5S818:11；D7S820:11,12；D8S1179:12,14；FGA:20；TH01:6,9.3；TPOX:11,12；vWA:14,18

同工酶

染色體

注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到人骨肉瘤細(xì)胞；U-2 OS [U2OS；U2-OS；U-2OS]后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-AEV/FITC熒光素標(biāo)記禽腦脊髓炎病毒抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-AEBP1/FITC熒光素標(biāo)記脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-AF6/Afadin/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-phospho-Afadin(Ser1718)/FITC熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-AGER/RAGE/FITC熒光素標(biāo)記晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-AGEs/FITC熒光素標(biāo)記晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-AGER/RAGE/Cy3熒光素Cy3標(biāo)記晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Aggrecan/FITC熒光素標(biāo)記軟骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Aggrecan2/ADAMTS-5/FITC熒光素標(biāo)記軟骨蛋白聚糖抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Agrin/FITC熒光素標(biāo)記聚集蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人骨肉瘤細(xì)胞；U-2 OS [U2OS；U2-OS；U-2OS]*Anti-proCNP/NPPC促尿鈉排泄肽前體C抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Nonylphenol任基酚抗體規(guī)格：0.2mg

*Anti-NPM核仁磷酸蛋白抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-NPM(Ser4)磷酸化核仁磷酸蛋白抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Phospho-NPM(Thr95)磷酸化核仁磷酸蛋白抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Phospho-NPM(Thr199)磷酸化核仁磷酸蛋白抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-NPY神經(jīng)肽Y抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-NPY2R神經(jīng)肽Y受體2抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-NPY1R神經(jīng)肽Y1受體抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-NQO1醌氧化還原酶抗體規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細(xì)胞之方法：
人骨肉瘤細(xì)胞；U-2 OS [U2OS；U2-OS；U-2OS]冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。