細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）人大細胞肺癌細胞；NCI-H460 [H460]圖片準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
我司常期代理ATCC

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產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人大細胞肺癌細胞；NCI-H460 [H460]圖片
形態(tài)特性上皮樣

生長特性貼壁生長

特征特性NCI-H460細胞株從一位大細胞肺癌患者的胸水中建立。細胞表達的p53mRNA易于檢測，其水平與正常肺細胞相當，未表現(xiàn)出DNA總體結構異常。角蛋白和波

蛋白纖維染色陽性，神經(jīng)絲三聯(lián)體蛋白陰性。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。

傳代情況P(139+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STRAmelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12；D13S317:13；D16S539:9；D18S51:13,15；D19S433:14；D21S11:30；D2S1338:17,25；D3S1358:15,18；D5S818:9,10；D7S820:9,12；D8S1179:12；FGA:21,23；TH01:9.3；TPOX:8；vWA:17

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到人大細胞肺癌細胞；NCI-H460 [H460]圖片后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-IGF-I/FITC熒光素標記標記胰島素樣生長因子-I抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IGF-II/FITC熒光素標記胰島素樣生長因子-II抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IGF-IIBP3/FITC熒光素標記胰島素樣生長因子2mRNA結合蛋白3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IGF-1R/FITC熒光素標記胰島素樣生長因子-I受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IGF-1R/FITC熒光素標記胰島素樣生長因子-I受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-phospho-IGF1Receptor(Tyr1161)/FITC熒光素標記磷酸化胰島素樣生長因子1受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IGFBP-1/FITC熒光素標記胰島素樣生長因子結合蛋白-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IGFBP-2/FITC熒光素標記胰島素樣生長因子結合蛋白-2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IGFBP-3/FITC熒光素標記胰島素樣生長因子結合蛋白-3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-IGFBP-4/IBP4/FITC熒光素標記胰島素樣生長因子結合蛋白-4抗體IgG規(guī)格：0.2ml
人大細胞肺癌細胞；NCI-H460 [H460]圖片*Anti-Caspase-9/FITC熒光素標記白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Caspase-9/FITC熒光素標記白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Caspase-9(Pry153)/FITC熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Caspase-10/FITC熒光素標記半胱胺酸蛋白酶-10抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Caspase-12(hunman)/FITC熒光素標記半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體(人)IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Caspase-12/FITC熒光素標記半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Caspase-13/FITC熒光素標記半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Caspase-9(Thr125)/FITC熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Alpha-Catenin/Alpha-cats/FITC熒光素標記α-連環(huán)蛋白抗體（α-α鏈接素）IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Beta-catenin/Beta-cats/FITC熒光素標記β-連環(huán)蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細胞之方法：
人大細胞肺癌細胞；NCI-H460 [H460]圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。