細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）小鼠胚胎成纖維細胞；MEF培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細胞名稱 小鼠胚胎成纖維細胞；MEF培養(yǎng)
形態(tài)特性成纖維細胞樣

生長特性貼壁生長

特征特性取孕9天的615小鼠胚胎，去除腦、心臟等培養(yǎng)建立。該細胞可用作飼養(yǎng)層細胞，支持胚胎干細胞ES的生長并維持ES未分化的狀態(tài)。當(dāng)作為飼養(yǎng)層細胞時，MEF需經(jīng)絲裂霉素C處理停止生長。建議作為ES細胞的飼養(yǎng)層時，MEF不要超過6代。

培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%CS

傳代方法1:3傳代；3~4天1次。

傳代情況P1

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測培養(yǎng)法（-）

STR-

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到小鼠胚胎成纖維細胞；MEF培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-MUC5AC/Mucin5AC/FITC熒光素標(biāo)記胃粘液素抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MuRF1/Trim63/FITC熒光素標(biāo)記肌肉細胞特異性泛素蛋白連接酶1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MTF-1/FITC熒光素標(biāo)記金屬反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MyD88/FITC熒光素標(biāo)記髓樣分化蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MyelinP0protein/FITC熒光素標(biāo)記外周髓磷脂P0蛋白/P0蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Myf6/FITC熒光素標(biāo)記生肌調(diào)節(jié)因子6抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Myt1/FITC熒光素標(biāo)記髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Myt1(Ser83)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MyoD1/Myf3/FITC熒光素標(biāo)記肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-MYOG/Myogenin/FITC熒光素標(biāo)記肌紅蛋白抗體(肌細胞生成素)IgG規(guī)格：0.2ml
小鼠胚胎成纖維細胞；MEF培養(yǎng)*Anti-DefensinBeta1/FITC熒光素標(biāo)記防御素β1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-DefensinBeta2/beta-defensin2/BD-2(rat)/FITC熒光素標(biāo)記防御素β2抗體（大鼠）IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Defensinalpha1,2,3/FITC熒光素標(biāo)記抗防御素α1,α2,α3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Defensinalpha4/FITC熒光素標(biāo)記防御素α4抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-DEKoncogene/FITC熒光素標(biāo)記DEK癌基因結(jié)合蛋白IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Deltex-1/FITC熒光素標(biāo)記Deltex-1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Desmin/FITC熒光素標(biāo)記結(jié)蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-DHAV/FITC鴨甲型肝炎A病毒抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-DIO2/FITC熒光素標(biāo)記脫酶2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-DISC1(CT)/FITC熒光素標(biāo)記DISC1C端抗體IgG規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細胞之方法：
小鼠胚胎成纖維細胞；MEF培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。