人角膜上皮細(xì)胞提取物【Human Eye: Normal Corneal Epithelial Cells Derivatives】

人角膜上皮細(xì)胞提取物是從人原代角膜上皮細(xì)胞提取的，人原代角膜上皮細(xì)胞從正常人角膜上皮組織制備。正常人角膜上皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

樹脂型™基因組DNA提純?cè)噭┖?/span>0次5-O-Ethylcleroindicin D4881382

樹脂型™PCR產(chǎn)物純化及膠回收試劑盒0次5-Hydroxymethyl-furoic acid633815-羥甲基-糠酸

硅膠膜型™質(zhì)粒DNA小量提取試劑盒次(2Z,6Z,E,14E,18E)-Farnesylfarnesol6953

硅膠膜型™基因組DNA提純?cè)噭┖写?/span>Solanesol1317茄尼醇

硅膠膜型™PCR產(chǎn)物純化及膠回收試劑盒次Methyl (9Z,11E)3-hydroxyoctadeca,11-dienoate98375
N-Acetyl-D-tryptophan  2280/1/5  中文名：N-乙?；?/span>-D-色氨酸  分子式：C13H14N2O3    三0酸腺苷酶   英文名稱：   Adenosine iphosphate   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ATP

Allyl cinnamate  1866-31-5  中文名：肉桂酸烯丙酯  分子式：C12H12O2    緊張素Ⅱ一型受體抗原   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AT1R

2-Aminofluorene  153-78-6  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N    抗緊張素‖受體︱型自身抗體   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AT1R-AA

(1R,2S)-1-Amino-2-indanol  136030-00-7  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO    緊張素Ⅰ   英文名稱：   AngiotensinⅠ   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANGⅠ

Amitraz  33089-61-1  中文名：雙甲瞇  分子式：C19H23N3    三(羥甲基)基鹽酸鹽   100g
乙酸銨(分子生物學(xué)級(jí))  Ammonium acetate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學(xué)級(jí) 單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA檢測(cè)試劑盒Monkeymonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit 96T/48T

微晶纖維素(100 um)  Cellulose, Microcrystalline  質(zhì)量規(guī)格：BR,100 um 單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

乳糖；α-乳糖,一水  alpha-Lactose, monohydrate  質(zhì)量規(guī)格：BR 單酸甘油脂脂解酶(monoacylglycerollipase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

氯化鈣二水  Calcium chloride, dihydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 單線態(tài)氧氣清除(scavenging)活性比色法篩選試劑盒20

乙二醇  Ethylene glycol  質(zhì)量規(guī)格：BR 單線態(tài)氧氣清除(scavenging)活性熒光篩選試劑盒20

硫酸鎂七水(分子生物學(xué)級(jí))  Magnesium sulfate, heptahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物 膽轉(zhuǎn)運(yùn)功能檢測(cè)試劑盒20

糖化酶;葡萄糖淀粉酶  Glucozyme  質(zhì)量規(guī)格：BR,10萬(wàn)u/G 膽紅素(Bilirubin)定量檢測(cè)試劑盒50

聚乙二醇4000  PEG 4000  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 膽堿酯酶(CHE)定量檢測(cè)試劑盒50

無(wú)水氫二鉀  Potassium phosphate, dibasic, anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 膽堿酯酶(CHE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

甲酰胺  Formamide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 淡綠(LIGHTGREEN)復(fù)染試劑盒50
人角膜上皮細(xì)胞提取物說(shuō)明書trans-4-Aminocyclohexanol  27489-62-9  中文名：  分子式：C6H13NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠過氧化物酶體增殖物活化受體γ   英文名稱：   Mouse Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PPARγ

Tranexamic acid  1197-18-8  中文名：凝血酸  分子式：C8H15NO2  度：98.0%      小鼠誘導(dǎo)型合成酶elisa試劑盒   小鼠誘導(dǎo)型合成酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠誘導(dǎo)型合成酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠誘導(dǎo)型合成酶試劑盒、小鼠誘導(dǎo)型合成酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Torososide A  165689-32-7  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠內(nèi)皮型合成酶elisa試劑盒   小鼠內(nèi)皮型合成酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠內(nèi)皮型合成酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠內(nèi)皮型合成酶試劑盒、小鼠內(nèi)皮型合成酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Topiramate  97240-79-4  中文名：托吡酯  分子式：C12H21NO8S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    豚鼠神經(jīng)肽Belisa試劑盒   豚鼠神經(jīng)肽B試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豚鼠神經(jīng)肽B試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠神經(jīng)肽B試劑盒、豚鼠神經(jīng)肽Beisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Tolvaptan  150683-30-0  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠游離脂肪酸elisa試劑盒   小鼠游離脂肪酸試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠游離脂肪酸試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠游離脂肪酸試劑盒、小鼠游離脂肪酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。