大鼠大隱靜脈組織提取物【Rat Vascular : Normal Saphenous Vein Derivatives】

大隱靜脈是長(zhǎng)的靜脈，靜脈血管壁薄、內(nèi)腔大，內(nèi)膜折疊形成靜脈瓣。靜脈瓣一般成對(duì)排列，呈半月?tīng)钚〈诔蛐模陟o脈回流，防止血液逆流。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍大鼠大隱靜脈組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

CTP 5’-三磷酸胞苷二鈉   mg2-(2-Aminoethyl)-methylpyrrolidine51382-(2-氨乙基)-N-甲基

Cytosine 胞嘧啶   5g2-(2-Aminobenzoyl)-benzoic acid114732-(2-甲酰)-苯甲酸

D-(+)Galactose D-半乳糖   25g 2-(2,2-Dimethyl,3-dioxolan-yl)propane,2-diol1291418

D-(+)-Galacturonic acid D-半乳糖醛酸   1g 1-Testosterone1965/6/51-睪酮

DAB 3,3’-二氨基胺四鹽酸水合物   1g/ 5g1-O-Methylnataloe-emodin33921
Coumarin 6  中文名：香豆素 6  分子式：C20H18N2O2S  度：98.0%  小鼠白介素-17(mouse IL-17)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

Benzotetramisole  中文名：苯并四咪唑  分子式：C15H12N2S  度：98.0%  小鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒  

Anthraflavic acid  中文名：二羥蒽醌  分子式：C14H8O4  度：98.0%  小鼠白介素1(IL-1)ELISA試劑盒  

1,4-Benzodioxane-6-carboxylic acid  中文名：1,4-苯并二氧六環(huán)-6-羧酸  分子式：C9H8O4  度：98.0%  小鼠八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4（OCT4）ELISA試劑盒  

Benactyzine hydrochloride  中文名：鹽酸貝那替嗪  分子式：C20H26ClNO3  度：98.0%  小鼠基脲敏感性胺氧化酶（SSAO）ELISA試劑盒
內(nèi)消旋-2,3-二巰基丁二酸(>98.0%(T))  meso-2,3-Dimercaptosuccinic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T) 人玻連蛋白(VTN)試劑盒 Human vionectin ELISA Kit

吡哆醛-L-谷氨酸二鉀鹽[藥物研究配體]  Pyridoxylidene-L-glutamic Acid Dipotassium Salt  質(zhì)量規(guī)格：藥物研究配體 人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanvionectin,VELISAKit 96T/48T

吡哆醛-L-異亮氨酸鉀鹽[藥物研究配體]  Pyridoxylidene-L-isoleucine Potassium Salt  質(zhì)量規(guī)格：藥物研究配體 人補(bǔ)體1q(C1q)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanCompleme1q,C1qELISAKit 96T/48T

1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷四鹽酸鹽(>98.0%(N))  1,4,7,10-Tetraazacyclododecane Tetrahydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N) 人補(bǔ)體1q(C1q)試劑盒 Human Compleme 1q ELISA Kit

己二酸雙(2-乙基己基)酯(>98.0%(GC))  Bis(2-ethylhexyl) Adipate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 人補(bǔ)體1抑制物抗體-IgG(C1INH-IgG)試劑盒 Human Compleme 1 inhibitor aoaibody-IgG,C1INH-IgG ELISA Kit

3,4-苯并芘(升華精制品)(>95.0%(GC))  3,4-Benzopyrene (purified by sublimation)  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 人補(bǔ)體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)試劑盒 Human Compleme 1 inhibitor aoaibody-IgM,C1INH-IgM ELISA Kit

雙(苯乙酰)二硫化物(>98.0%(HPLC))  Bis(phenylacetyl) Disulfide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC) 人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)試劑盒 Human Compleme 3 split product,C3SP ELISA Kit

苯并紅紫4B[pH指示劑]  Benzopurpurine 4B  質(zhì)量規(guī)格：pH指示劑 人補(bǔ)體7(C7)試劑盒 Human Compleme 7 ELISA Kit

五甲氧基紅(>98.0%(HPLC))  Pentamethoxy Red  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC) 人補(bǔ)體C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1(C1QTNF1/CP1)試劑盒 Human C1QTNF1 ELISA Kit

苯甲基橙(>95.0%(W))  Benzyl Orange  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(W) 人補(bǔ)體蛋白3(C3)試劑盒 Human Compleme 3,C3 ELISA Kit
大鼠大隱靜脈組織提取物說(shuō)明書組織多肽抗原(TPA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2,2'-Bicinchoninic acid  1245-13-2  中文名：2,2'-二辛可寧酸  分子式：C20H12N2O4  度：98.0%   

組胺(HIS)ELISAKit     Albendazole  54965-21-8  中文名：阿苯達(dá)唑  分子式：C12H15N3O2S 

組胺(HIS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2-(Phenylmethoxy)-naphthalene  中文名：2-萘酚芐基醚  分子式：C17H14O  度：98.0%

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1elisa試劑盒   轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1試劑盒、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Agomelatine  138112-76-2  中文名：阿戈美拉汀  分子式：C15H17NO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒     Afatinib  850140-72-6  中文名：阿法替尼  分子式：C24H25ClFN5O3  度：98.0%

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。