肺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物【Human Lung MatchPair: Normal Pulmonary Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人肺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人原代肺上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人原代肺上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人肺組織和腫瘤組織中制備。正常人肺組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

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細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

剝離硅烷   0ml 4-Chlorodehydromethyltestosterone244634-氯去氫甲基睪酮

超低分子量蛋白電泳試劑盒   次/4-Chloro-iodoquinazoline985561

蛋白濃縮試劑盒   次 4-Bromomethyl-cyanobiphenyl1147724

乙酰胺溶液   ×0.6ml 4-Biphenylcarboxylic acid9224-苯基苯甲酸

非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒   次 4-Benzyloxyindole28964-芐氧基吲哚
Falcarinol  中文名：  分子式：C17H24O  度：%  兔子睪(T)ELISA試劑盒           

2-C-Methyl-D-erythro,4-lactone  中文名：  分子式：C5H8O4  度：98.0%  兔子肝細(xì)胞生長因子elisa試劑盒   兔子肝細(xì)胞生長因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子肝細(xì)胞生長因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子肝細(xì)胞生長因子試劑盒、兔子肝細(xì)胞生長因子試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Tetrahydrolachnophyllum lactone  中文名：  分子式：C10H14O2  度：90.0%  兔子皮質(zhì)elisa試劑盒   兔子皮質(zhì)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子皮質(zhì)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子皮質(zhì)試劑盒、兔子皮質(zhì)elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

(Z)-Lachnophyllum lactone  中文名：  分子式：C10H10O2  度：%  兔子皮質(zhì)醇elisa試劑盒   兔子皮質(zhì)醇試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子皮質(zhì)醇試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子皮質(zhì)醇試劑盒、兔子皮質(zhì)醇elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Araliadiol  中文名：  分子式：C15H20O2  度：%  兔子腦素elisa試劑盒   兔子腦素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子腦素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子腦素試劑盒、兔子腦素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
石蠟油  Paraffin oil, light fraction  質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級(jí),PCR Grade 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)試劑盒 Rat ansforming Growth Factor β1,TGF-β1 ELISA kit

乙酸鉀  Potassium acetate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí) 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1受體(TGF-β1R)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β1 receptor,TGF-β1R ELISA kit

無水乙酸鈉   acetate, anhydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí) 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β2,TGF-β2 ELISA kit

低熔點(diǎn)瓊脂糖；具有低凝膠溫度的瓊脂糖  Agarose, low gelling temperature  質(zhì)量規(guī)格：BR;具有低凝膠溫度 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2受體(TGF-β2R)試劑盒 Rat ansforming growth factor β2 receptor,TGF-β2R ELISA Kit

無水二氫鉀  Potassium phosphate, monobasic, anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí) 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)試劑盒 Rat ansforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA Kit

6-芐氨基嘌呤  6-Benzylamino purine  質(zhì)量規(guī)格：>99% 大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)試劑盒 Rat ansforming growth factor-beta-stimulated Protein clone-22,TSC22 ELISA Kit

水(HPLC grade)  Water  質(zhì)量規(guī)格：HPLC grade 大鼠轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(T)試劑盒 Rat ansthyretin,T ELISA Kit

馬來酸,順丁烯二酸  Maleic acid  質(zhì)量規(guī)格：AR,HPLC>99% 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratansferrieceptor,TFRELISAKit 96T/48T

硫酸銨  Ammonium sulfate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí) 大鼠轉(zhuǎn)移抑制基因KISS1蛋白(KISS1/Kisspeptin 1)試劑盒 Rat Kisspeptin 1,KISS1 ELISA Kit

氯化銫  Cesium chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí) 大鼠組胺(HIS)ELISA檢測(cè)試劑盒RatHistamine,HISELISAKit 96T/48T
肺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物兔2型膠原交聯(lián)C末端肽   英文名稱：   Rabbit C.terminal Telopeptides of type II collagen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CTX-2  4β-Hydroxywithanolide E  54334-04-2  中文名：4β-羥基醉茄內(nèi)酯E  分子式：C28H38O8 

兔(rabbit NO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  5-Hydroxymethyl-2-furoic acid  6338-41-6  中文名：5-羥甲基-2-糠酸  分子式：C6H6O4  度：%  關(guān)鍵詞：  抗腫瘤; 對(duì)照品; 標(biāo)準(zhǔn)品; 微生物代謝產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔(NO)ELISAKit     5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  24065-33-6  中文名：  分子式：C5H3ClO2S 

吐溫80   100ml  4-Aminobutyric acid  1956/12/2  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

土壤總0/有機(jī)0/無機(jī)0含量測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  116-63-2  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S