實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線(xiàn)性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì)：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過(guò)溶解曲線(xiàn)，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過(guò)程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì)，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。
（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶(hù)的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

乙酸-1-奈酯，英文名或英文縮寫(xiě)：α-Napthyl acetate，級(jí)別：超純，98%，規(guī)格：1克  人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活物(HGFA)免疫試劑盒 Human HGFA ELISA kit
維生素 EVitamin E  RatHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
DL-MineDL-蛋酸100克BR，99%  BLOTTO-10核酸雜交封閉溶液100毫升
1,3-二亞安基異吲哚啉 97% 1,3-DIIMINOISOINDOLINq 27200-34-  MouseIerleukin1α,IL-1αELISA試劑盒小鼠白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
美沙拉嗪 MqsclcMinq 89-27-6  小鼠(E)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
十二烷shēng huà shì jì容量：1克  Human cytovillin / Ezrin protein (cytovillin/ezrin) ELISA Kit 人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)ELISA試劑盒
Poly-L-Lysine 25mg/100mg/1g原裝 Sigma P2636  HumanSS-A/RoaibodyELISAKit 人抗SS-A/Ro抗體ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
γ-球蛋白(牛)100克  HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4ELISA試劑盒人周期素依賴(lài)性激酶4(CDK-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
6-流鳥(niǎo)嘌呤 6-Thiogucninq 124-4-7  組織GRK5激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
BETAINExy7noCHLORIDE甜菜堿超純級(jí)  Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鄰胺shēng huà shì jì容量：25毫克  Humanlatemembraneprotein-1,LMP-1ELISAKit人潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
半固體瓊脂Motility Test Medium(Semisolid)  人原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
鎳NTA瓊脂糖凝膠6FF100毫克  小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)免疫試劑盒 Mouse Tissue-type Plasiminogen Actilyse,t-PA ELISA Kit
溴代三(二甲基基)... Bromotris(dimethylamino)phosphonium he... 50296-37-2 1G 通用試劑  細(xì)小病毒(PPV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T
乳糖酶 Lcctcsq 9031-11-  Humanphosphatidylserine,PSELISA試劑盒人1脂酰絲氨酸(PS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
二shēng huà shì jì容量：RT，避光250克  HumanCaspase3,Casp-3ELISAKit 人胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
40635-66-32-乙酰氧基異丁酰錄1-Chlorocarbonyl-1-metxyletxyl acetate  Humaninsulin-likegrowthfactors1,IGF-1ELISA試劑盒人胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
沒(méi)食子酸一水物25毫克2～8℃，避光  組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)生物素明膠法比色定量檢測(cè)試劑盒20次
2,3,4-三氧基本全 2',3',4'-TRIMqTHOXYcCqTOPHqNONq 13909-73-4  HumanLebtospiraIgMELISAKit人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
酸鈉1克保存：-20℃  人孕酮受體(PGR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡(jiǎn)介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái)，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
頭孢霉屬通用探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明2）競(jìng)爭(zhēng)法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi)，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。