小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞提取物【Mouse Uterus: Normal Uterus Derivatives】

小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞提取的，小鼠原代子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞從正常小鼠子宮組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

磷酸肌酸激酶(CPK)   1KU6-Aminonicotinic acid316796-氨基煙酸

磷酸葡萄糖變位酶(PGM)   0U3-Amino-naphthoic acid595923-氨基-萘甲酸

磷酸葡萄糖異構(gòu)酶 PGI   0U(S)-(-)-Amino-methyl,1-diphenyl-butanol7865(S)-(-)-氨基-甲基,1-二苯基-丁醇

木瓜蛋白酶   5g2-Amino-methoxybenzothiazole546492-氨基-并噻唑

凝膠促凝劑   g4-Amino-N-methylbenzamide627424-氨基-N-甲基苯甲酰胺
Jacaranone  60263-07-2  中文名：  分子式：C9H10O4    Rat platelet activating factor (PAF) ELISA Kit 大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒

3-Hydroxychimaphilin  33253-99-5  中文名：3-羥基梅笠草素  分子式：C12H10O3    Humansolublevascularendothelialgrowthfactorreceptor-2,VEGFR-2/sFLK-1ELISAKit 人可溶性?xún)?nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chimaphilin  482-70-2  中文名：梅笠草素  分子式：C12H10O2    HumanE2/ubiquitin-conjugatingenzyme,E2/UBCEELISA試劑盒人泛素結(jié)合酶(E2/UBCE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Prerubialatin  1667718-89-9  中文名：  分子式：C27H20O7    組織PAK2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

(S)-4-Methoxydalbergione  2543-95-5  中文名：(S)-4-甲氧基黃檀醌  分子式：C16H14O3    Humanpermeabilityglycoprotein,P-gpELISAKit人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鋅試劑(≥85%（HPLC）)  Zincon  質(zhì)量規(guī)格：≥85%（HPLC） 抗淬滅劑Ⅰ(活體染色持久發(fā)光)5/20毫升

1,3-二甲基-5-吡唑酮  1,3-Dimethyl-5-pyrazolone  質(zhì)量規(guī)格：0.96 離子膜通道轉(zhuǎn)運(yùn)功能檢測(cè)試劑盒20

氟啶胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Fluazinam  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 粒性白細(xì)胞染色試劑盒50

氟節(jié)胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Flumetralin  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 馬β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA檢測(cè)試劑盒Horseamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISAKit 96T/48T

氯吡脲（標(biāo)準(zhǔn)品）  Forchlorfenuron  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 馬β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA檢測(cè)試劑盒horseBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T

氯氟吡氧乙酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Fluroxypyr  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 馬球蛋白E(IgE)ELISA檢測(cè)試劑盒HorseImmunoglobulinE,IgEELISAKit 96T/48T

麥穗寧（標(biāo)準(zhǔn)品）  Fuberidazole  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 貓p27核心抗原(P27)ELISA檢測(cè)試劑盒Felisp27coreaigen,P27ELISAKit 96T/48T

雙氟磺草胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Florasulam  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8% 貓α干擾素(IFN-α)ELISA檢測(cè)試劑盒FelisIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T

增甘膦（標(biāo)準(zhǔn)品）  Glyphosine  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 貓細(xì)小病毒抗體(FPV)ELISA檢測(cè)試劑盒Felisparvovirus,FPVELISAKit 96T/48T

氟鈴脲（標(biāo)準(zhǔn)品）  Hexaflumuron  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99% 綿羊白介素1(IL-1)ELISA檢測(cè)試劑盒SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T
小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞提取物價(jià)格焦碳酸二乙脂   10ml  Amorolfine hydrochloride  中文名：鹽酸阿莫洛芬  分子式：C21H36ClNO  度：98.0%

膠質(zhì)纖維酸性蛋白   英文名稱(chēng)：   glial fibrillary acidic protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   GFAP  3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone  899822-97-0  中文名：  分子式：C17H25NO3 

膠質(zhì)細(xì)胞源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子   英文名稱(chēng)：   glial cell line-derived neuoophic factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   GDNF  L-Dihydroorotic acid  中文名：L-4,5-二氫乳清酸  分子式：C5H6N2O4 

堿性酯酶染液   Wright'dye  4,4'-Cyclohexylidenebisphenol  中文名：4,4'-環(huán)亞己基雙苯酚  分子式：C18H20O2  度：98.0%

堿性木聚糖酶測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/24樣  Testosterone enanthate  315-37-7  中文名：庚酸睪酮  分子式：C26H40O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。