細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）山羊皮膚細胞；WGS1圖片準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
我司常期代理ATCC

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產品描述：
細胞名稱 山羊皮膚細胞；WGS1圖片
形態(tài)特性成纖維細胞樣

生長特性貼壁生長

特征特性該細胞系來源于一雄性山羊的耳組織。1990年由中科院昆明細胞庫建立。

培養(yǎng)條件McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)15%NBS

傳代方法1:2傳代；3-4天一次

傳代情況P3

凍存條件基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測熒光法（-）

STR-

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到山羊皮膚細胞；WGS1圖片后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
SV40T轉化的人胚腎細胞;293T

CD302 Others Mouse 小鼠 CD302 / CLEC13A 人細胞裂解液 (陽性對照)

HAL-01 人急性混合型白血病細胞

HCT-8 [HRT-18]人回盲腸癌細胞 HCT-8 [HRT-18] human ileocecal carcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

TNFSF11 Protein Mouse 重組小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽)

人肺間充質干細胞(肺)(HPMSC)(5×105) U251人膠質瘤細胞 Human
山羊皮膚細胞；WGS1圖片CL-0396NCI-H226(人肺鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2

CFR Others Human 人 CFR / CFR-alpha 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人脈絡叢上皮細胞RNAHCPEpiC miRNA5 μg

6T-CEM細胞，T細胞白血病 人巨細胞性肺癌細胞,801-D細胞 細胞

貓腎細胞;CRFK

ADAM15 Others Human 人 ADAM15 / MDC15 人細胞裂解液 (陽性對照)
冷凍保存細胞之方法：
山羊皮膚細胞；WGS1圖片冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。