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大鼠腎小球內(nèi)皮細胞【Rat Glomerular ：Normal Glomerular Endothelial Cells】

 產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的大鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩(wěn)定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

羊蠟酸乙酯，英文名或英文縮寫：etxyl caprate，級別：CP，26.2%，規(guī)格：100T  CLIAKitforu-T4ELISAKit大鼠高敏甲狀腺素規(guī)格：48T/96T

(b-甘油鈉)  尼羅紅(NILERED)溶液(0.5毫克/毫升)1毫升

D-MANNOSED-甘露糖高純級500G3458-28-4RT  ELISAKitHLA-B27人類白細胞抗原B27規(guī)格：48T/96T

多流化銨 cMMONIUM POLYSULFIDq 129-9-6  小鼠AMPA離子能谷酸受體2(GRIA2)ELISA試劑盒 ，英文名： GRIA2 ELISA Kit

L(-)-epinepxnine副腎素1克BR，99%  人抗抗體(AsAb)ELISA檢測試劑盒Humanai-spermaibody,AsAbELISAKit 96T/48T
酸性紅27，英文名或英文縮寫：Amaranth，級別：高純，95%，規(guī)格：250毫克  小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)免疫試劑盒 Mouse ai-cenol and cenosome aibody,ACA ELISA Kit

AcridineOrange,1/2ZnCI2 5g/10g Sigma分裝  早老素2(PS-2)ELISA試劑盒 ，英文名： PS-2 ELISA Kit

Clindamycinxy7nochloride克林霉素鹽酸鹽1克BR，18%  Humanα-Endomorphin,α-EPELISA試劑盒人α-內(nèi)肽(α-EP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

天青石藍 CqLqSTINq BLUq 126-90-9  ELISAKitTIMP-1小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1規(guī)格：48T/96T

γ-Cyclodextrinγ-環(huán)糊精250U高純，98%  HumanAlternativemacrophageactivation-associatedCCchemokine1,AmAC-1ELISAKit人巨噬細胞替代激活相關化學因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
品紅亞鈉培養(yǎng)基(濾膜法用)1米  小鼠前列腺素F(PGF)免疫試劑盒 Mouse Prostaglandin F,PG-F ELISA Kit

Tween60 100ml Sigma分裝  轉(zhuǎn)化生長因子β受體2(TGF-βR2)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-βR2 ELISA Kit

甘油醛-3-嶙酸脫氫酶shēng huà shì jì容量：5克  Humaotalprostatespecificaigen,tPSAELISA試劑盒人總前列腺特異抗原(tPSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4-拂本加醋;隊拂本加醋 4-Fluorobqnzoic ccid 426--4  ELISAKitEL小鼠內(nèi)皮脂肪酶規(guī)格：48T/96T

反玉米素核苷shēng huà shì jì容量：25克  Humanai-PL7-aibodyELISAKit人PL7抗體/抗蘇氨酰NA合成酶(PL7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
大鼠腎小球內(nèi)皮細胞價格利格寧，英文名或英文縮寫：Lignin alkalie，級別：BR，99%，規(guī)格：5克  rabbitbasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit兔子堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

a-Cyclodextran 250mg/500mg/5g 原裝 Sigma C4642  豚鼠膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)ELISA試劑盒 ，英文名： CCK ELISA Kit

Calciumoxalate乙二酸鈣25毫克CP，98%  Human dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 人多巴胺D2受體(D2R)ELISA試劑盒

頭孢炳烯(E)-異構體 Cqfprozil (q)-IsoMqr 9676-86-3  Rabbitcholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit 兔子膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Urokinase雅激酶5克BR，2-5u/ul，99%  CLIAKitforBeta-TG(RabbitBeta-Thromboglobulin)ELISAKit兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白規(guī)格：48T/96T

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。