PrimaCell™小鼠角膜上皮細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達(dá)載體(pcDNA-AM)測序引物對2OD  3650--09-7鼠尾草酸規(guī)格  Carnosic acid

RatHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISA試劑盒大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  19057-60-4薯蕷皂苷  Dioscin

小鼠脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)ELISA試劑盒 ，英文名： FABP4 ELISA Kit  512-04-9薯蕷皂苷元說明書  Diosgenin

犬白細(xì)胞分化抗原8(CD8)ELISA檢測試劑盒Canineclusterofdiffereiation8,CD8ELISAKit 96T/48T  33171-05-0雙去氧基姜黃素品牌  Bisdemethoxycurcumin

犬前列腺素E2(PGE2)試劑盒 Canine Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit  22888-70-6水飛薊賓規(guī)格  Silymarin
40246-10-4黃豆黃苷說明書  Glycitin   載玻片細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

3-羥基巴戟醌規(guī)格  3-Hydroxy-　morindone   載玻片細(xì)胞αSMA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

3-羥基巴戟醌  3-Hydroxy-　morindone  載玻片細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

3-O-α-L-鼠李糖-(1→2)-β-葡萄糖麥冬甙元規(guī)格  Ophiogenin-3-O-α-L-rhamnosyl-(1→2)-β-D-glucoside   載玻片細(xì)胞TUBULIN蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

39524-08-8川續(xù)斷皂苷VI說明書   Asperosaponin Ⅵ   載玻片細(xì)胞TUBULIN蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20
山羊γ干擾素(IFN-γ)ELISA檢測試劑盒GoatIerferonγ,IFN-γELISAKit 96T/48T  520-33-2橙皮素  Hesperitin

犬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)試劑盒 Canine Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit  73-03-0蟲草素說明書  cordycepin

英文名稱Mouse17-ANPELISAKit小鼠17-羥-孕同(17-ANP)規(guī)格：96T/48T  478-01-3川陳皮素品牌  Nobiletin

腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(EerotoxigenicE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測試劑盒20  58812-37-6川楝素規(guī)格  Toosendanin

RatFreeThyroxine,FT4ELISA試劑盒大鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1124-11-4川芎嗪  Chuanxiongzine
PrimaCell™小鼠角膜上皮細(xì)胞試劑盒價格5041-81-6異甘草苷說明書  Isoliquiritoside  植物葉綠體外膜功能檢測試劑盒20

50298-90-3雪膽素乙說明書  Cucurbitacin Ⅱb   植物葉綠體F型ATP酶(FtypeATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20

50298-90-3雪膽素乙  Curcubitacin IIb   植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50

502-65-8番茄紅素說明書  lycopene   植物細(xì)胞周期G0期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10

501-98-4對香豆酸規(guī)格  p-Coumaric acid   植物細(xì)胞色素C氧化酶活性測定試劑盒20