PrimaCell™人主動脈平滑肌細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

病毒包裝20樣本  （R型）原人參二醇規(guī)格  20(R)Protopanaxdiol

RatFibronectin,FNELISA試劑盒大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  (R型)原人參三醇  20(R)Protopanaxatriol

小鼠組織蛋白酶L(CTSL)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSL ELISA Kit  （R型）人參皂苷Rh1說明書  20(R)Ginsenoside Rh1

綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin1β,IL-1βELISAKit 96T/48T  （R型）人參皂苷Rh2品牌  20(R)Ginsenoside Rh2

犬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)試劑盒 Dog insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP3 ELISA kit  15356-70-4DL-薄荷醇規(guī)格  DL-Menthol
952068-64-3巴利森苷D規(guī)格  Parishin D    組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-3)活性比色法定量檢測試劑盒20

952068-57-4巴利森苷E說明書  Parishin E    組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)生物素明膠法比色定量檢測試劑盒20

95041-90-0毛蘭素別名：品牌  Erianin  組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)捕獲檢測試劑盒20

94987-08-3絞股藍皂苷  Stevenleaf   組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)活性熒光定量檢測試劑盒20

94987-08-3絞股藍皂苷XLIX  Gypenoside XLIX   組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-13)活性比色法定量檢測試劑盒20(10樣本)
ratai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISAKit大鼠抗心1脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  19275-46-83-異倒捻子素  3-isomangostin

組蛋白H2B-K16乙酰化檢測試劑盒10/20等  20931-37-7β-倒捻子素說明書  Beta-mangostin

MouseAndrostenedione,ASDELISA試劑盒小鼠雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  98243-57-3梭砂貝母堿品牌  Hupehenine

小鼠游離狀腺原酸(Free-T3)ELISA試劑盒 ，英文名： Free-T3 ELISA Kit  541-15-1左旋肉堿規(guī)格  L-carnitine

小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA檢測試劑盒Mousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 96T/48T  39262-14-1人參皂苷CK  Ginsenoside CK
PrimaCell™人主動脈平滑肌細胞試劑盒培養(yǎng)12777-70-7東北貫眾素說明書  Dryocrassin ABBA   英文名稱RatFIXELISAKit大鼠凝血因子IX(FIX)規(guī)格：96T/48T

126-17-0澳洲茄胺說明書  Solasodine   英文名稱RatFIIELISAKit大鼠凝血因子II(FII)規(guī)格：96T/48T

126-17-0澳洲茄胺說明書  Solasodine   英文名稱RatFIIELISAKit大鼠凝血因子II(FII)規(guī)格：96T/48T

126105-12-2賽門苷I品牌  Siamenoside I   英文名稱RatFBELISAKit大鼠纖維蛋白原(FB)規(guī)格：96T/48T

126105-11-111-0-羅漢果苷V規(guī)格  11-oxo-mogroside V   英文名稱RatFBELISAKit大鼠纖維蛋白原(FB)規(guī)格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。