產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™人主動脈平滑肌細胞試劑盒培養(yǎng) | 英文名稱 | | 貨號 | EYX99506 |
PrimaCell™人主動脈平滑肌細胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 
實驗要點及說明; 1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
 操作要點; 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。 病毒包裝20樣本 (R型)原人參二醇規(guī)格 20(R)Protopanaxdiol RatFibronectin,FNELISA試劑盒大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T (R型)原人參三醇 20(R)Protopanaxatriol 小鼠組織蛋白酶L(CTSL)ELISA試劑盒 ,英文名: CTSL ELISA Kit (R型)人參皂苷Rh1說明書 20(R)Ginsenoside Rh1 綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin1β,IL-1βELISAKit 96T/48T (R型)人參皂苷Rh2品牌 20(R)Ginsenoside Rh2 犬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)試劑盒 Dog insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP3 ELISA kit 15356-70-4DL-薄荷醇規(guī)格 DL-Menthol 952068-64-3巴利森苷D規(guī)格 Parishin D 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-3)活性比色法定量檢測試劑盒20 952068-57-4巴利森苷E說明書 Parishin E 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)生物素明膠法比色定量檢測試劑盒20 95041-90-0毛蘭素別名:品牌 Erianin 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)捕獲檢測試劑盒20 94987-08-3絞股藍皂苷 Stevenleaf 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)活性熒光定量檢測試劑盒20 94987-08-3絞股藍皂苷XLIX Gypenoside XLIX 組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-13)活性比色法定量檢測試劑盒20(10樣本) ratai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISAKit大鼠抗心1脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 19275-46-83-異倒捻子素 3-isomangostin 組蛋白H2B-K16乙酰化檢測試劑盒10/20等 20931-37-7β-倒捻子素說明書 Beta-mangostin MouseAndrostenedione,ASDELISA試劑盒小鼠雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 98243-57-3梭砂貝母堿品牌 Hupehenine 小鼠游離狀腺原酸(Free-T3)ELISA試劑盒 ,英文名: Free-T3 ELISA Kit 541-15-1左旋肉堿規(guī)格 L-carnitine 小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA檢測試劑盒Mousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 96T/48T 39262-14-1人參皂苷CK Ginsenoside CK PrimaCell™人主動脈平滑肌細胞試劑盒培養(yǎng)12777-70-7東北貫眾素說明書 Dryocrassin ABBA 英文名稱RatFIXELISAKit大鼠凝血因子IX(FIX)規(guī)格:96T/48T 126-17-0澳洲茄胺說明書 Solasodine 英文名稱RatFIIELISAKit大鼠凝血因子II(FII)規(guī)格:96T/48T 126-17-0澳洲茄胺說明書 Solasodine 英文名稱RatFIIELISAKit大鼠凝血因子II(FII)規(guī)格:96T/48T 126105-12-2賽門苷I品牌 Siamenoside I 英文名稱RatFBELISAKit大鼠纖維蛋白原(FB)規(guī)格:96T/48T 126105-11-111-0-羅漢果苷V規(guī)格 11-oxo-mogroside V 英文名稱RatFBELISAKit大鼠纖維蛋白原(FB)規(guī)格:96T/48T 運輸和保存; 視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。 1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復(fù)蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 |