人體膀胱癌組織源細(xì)胞【Cancer: Human Bladder Cancer Derivatives】

膀胱癌是發(fā)生于膀胱的癌病類疾病，泛指各種出自膀胱的惡性腫瘤，常見的膀胱癌細(xì)胞來自膀胱內(nèi)面黏膜表皮，是一種移行上皮細(xì)胞，貼壁生長，具有無限增殖能力，喪失接觸抑制現(xiàn)象，癌細(xì)胞間粘著性減弱。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體膀胱癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

N6-異戊烯基腺嘌呤溶液（2ip）5×1ml2''-O-Acetylsprengerinin C1273

Neomycin solution 新霉素溶液5×1ml2-n-Propyl-methyl-(1-methylbenzimidazole-yl)benzimidazole1526282

Penicillin G Na Solution 青霉素G鈉鹽溶液 mg/ml5×1ml 2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate1587352-萘基N-苯甲酰基苯丙氨酸酯

Penicillin-Streptomycin Solution 0×青鏈霉素溶液0ml2-Methylsulfanylpyrimidin(3H)-one575

Penicillin-Streptomycin Solution 青鏈霉素溶液(0×)0ml2-Methylanthraquinone8442-甲基蒽醌
Dimethylolurea  中文名：雙羥甲脲  分子式：C3H8N2O3    豬水通道蛋白4（AQP4）ELISA試劑盒  

Dihydrotanshinone I  中文名：  分子式：C18H14O3    豬瘦素(LEP)ELISA試劑盒  

Dihydrosenkyunolide C  中文名：二氫洋川芎內(nèi)酯C  分子式：C12H14O3    豬食欲素受體(OXR)ELISA試劑盒  

Dihydroisotanshinone II  中文名：  分子式：C18H14O3    豬食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA試劑盒           

Dihydroisotanshinone I  中文名：  分子式：C18H14O3    豬髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   豬髓0脂堿性蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬髓0脂堿性蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬髓0脂堿性蛋白試劑盒、豬髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。
羥乙基纖維素(20000~30000 mpa.s)  Hydroxyethyl Cellulose  質(zhì)量規(guī)格：粘度20000~30000 mpa.s 人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)試劑盒 Human iFABP ELISA Kit

羥乙基纖維素(5500-6500 mpa.s)  Hydroxyethyl Cellulose  質(zhì)量規(guī)格：粘度5500-6500 mpa.s 人超0酸化微管相關(guān)蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)試劑盒 Human hyper phosphorylated MAPT ELISA kit

羥乙基纖維素(40~60 mpa.s)  Hydroxyethyl Cellulose  質(zhì)量規(guī)格：粘度40~60 mpa.s 人超抗原(Sag)ELISA檢測試劑盒Humansupperaigen,SagELISAKit 96T/48T

異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)  Isopropyl β-D-thiogalactoside  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒 Human high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit

甘露糖；D-甘露糖  D-Mannose  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)試劑盒 Human Ula Sensitive Prostate Specific Aigen,PSA U S ELISA Kit

D-甘露糖(標(biāo)準(zhǔn)品)  D-Mannose  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 人超敏熱休克蛋白60(HSP-60)試劑盒 Human Ula Sensitive Heat Shock Protein 60,HSP-60 ELISA Kit

N-辛酰基-N-甲基葡糖胺(MEGA-8)  N-Octanoyl-N-methylglucamine  質(zhì)量規(guī)格：≥97% ,進(jìn)分 人超敏熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒 Human Ula Sensitive Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit

N-癸酰基-N-甲基葡糖胺(MEGA-10)  N-Decanoyl-N-methylglucamine   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人巢蛋白1(NID1)試劑盒 Human Nidogen 1,NID1 ELISA Kit

辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷  n-Octyl-β-D-Thioglucopyranoside  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人成骨生長肽(OGP)ELISA檢測試劑盒HumanOsteogenicGrowthPeptide,OGPELISAKit 96T/48T

D-綿子糖五水；蜜三糖五水  D(+)-Raffinose pentahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF10)試劑盒 Human FGF10 ELISA Kit
人體膀胱癌組織源細(xì)胞說明書兔子催乳素elisa試劑盒   兔子催乳素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子催乳素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子催乳素試劑盒、兔子催乳素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     8-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  中文名：8-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S 

兔子催乳素elisa試劑盒   兔子催乳素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子催乳素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子催乳素試劑盒、兔子催乳素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione  中文名：  分子式：C28H40O3 

兔子催乳素(PRL)ELISA試劑盒     6β-Hydroxystigmast-4-en-3-one  中文名：6β-羥基豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O2  度：95.0%

兔子催乳素(PRL)ELISAKit                 5-Aminosalicylic acid  中文名：5-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3 

兔子促上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒              6β-Hydroxystigmast-4-en-3-one  中文名：6β-羥基豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O2