人腎上皮細(xì)胞提取物【Human Kidney : Normal Kidney Epithelial Cell Derivatives】

人腎上皮細(xì)胞提取物是從人腎上皮細(xì)胞提取的，人腎上皮細(xì)胞從正常人腎組織制備。正常人腎組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

致病性蠟樣芽孢桿菌雙重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒TTorososide A1656892

五種致瀉性大腸埃希氏菌多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒（A版本）TTopiramate9729托吡酯

五種致瀉性大腸埃希氏菌多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒（B版本）TTolvaptan168托伐普坦

副溶血性弧菌/tdh/trh毒力基因三重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒TToltrazuril6043托曲珠利

副溶血性弧菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒TTolazoline hydrochloride597鹽酸妥拉唑林
Pemetrexed  中文名：培美曲塞二鈉  分子式：C20H21N5O6  度：98.0%  小鼠白介素2(IL-2)ELISAKit  

4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester  中文名：  分子式：C16H16N4O3  度：98.0%  小鼠白介素4(IL-4)ELISAKit              

Pemetrexed di  中文名：培美曲塞二鈉  分子式：C21H23N5Na2O6  度：98.0%  小鼠17-類(lèi)固醇(17-KS)ELISA試劑盒  

Ethyl 5-amino-4-cyano-3-(2-ethoxy-2-oxoethyl)thiophene-2-carboxylate  中文名：  分子式：C12H14N2O4S  度：98.0%  小鼠17羥孕(17-OHP)ELISA試劑盒  

5-Fluorouracil  中文名：  分子式：C4H3FN2O2  度：98.0%  小鼠17羥皮質(zhì)類(lèi)固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒
皂土(膨潤(rùn)土)(Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑)  Bentonite  質(zhì)量規(guī)格：Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑 犬透明質(zhì)酸(HA)試劑盒 Canine Hyaluronic acid,HA ELISA Kit

皂土(膨潤(rùn)土)(Bentone SD-2,適于中高極性溶劑)  Bentonite  質(zhì)量規(guī)格：Bentone SD-2,適于中高極性溶劑 犬透明質(zhì)酸酶1(HAase 1)試劑盒 Canine Hyaluronidase 1,HAase 1 ELISA Kit

活性炭粉(AR,200目,粉末狀,褐色)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：AR,200目,粉末狀,褐色 犬透明質(zhì)酸酶2(HAase 2)試劑盒 Canine Hyaluronidase 2,HAase 2 ELISA Kit

活性炭(CP,200目,粉末狀,褐色)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：CP,200目,粉末狀,褐色 犬透明質(zhì)酸酶3(HAase 3)試劑盒 Canine Hyaluronidase 3,HAase 3 ELISA Kit

活性炭顆粒(AR,20-50目)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：AR,20-50目 犬透明質(zhì)酸酶4(HAase 4)試劑盒 Canine Hyaluronidase 4,HAase 4 ELISA Kit

活性炭(電鍍脫色,200目,from wood)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：電鍍脫色,200目,from wood 犬維生素A(VA)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminA,VAELISAKit 96T/48T

活性炭(催化劑載體,8-16目)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：催化劑載體,8-16目 犬維生素A(VA)試劑盒 Dog Vitamin A,VA ELISA Kit

活性炭(凈水、氣體化,棒,φ1.0mm)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：凈水、氣體化,棒,φ1.0mm 犬維生素E(VE)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminE,VEELISAKit 96T/48T

活性炭(凈水、氣體化,10-24目)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：凈水、氣體化,10-24目 犬維生素E(VE)試劑盒 Canine Vitamin E,VE ELISA Kit

活性炭(電鍍脫色,40-60目,from Nutshell)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：電鍍脫色,40-60目,from Nutshell 犬維生素K1(VK1)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminK1,VK1ELISAKit 96T/48T
人腎上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)Stavudine  3056-17-5  中文名：司他夫定  分子式：C10H12N2O4    HumanAi-SomaticMuscleAibody,ASAELISAKit 人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Albendazole  54965-21-8  中文名：阿苯達(dá)唑  分子式：C12H15N3O2S    Humancytokeratin20,CK-20ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白20(CK-20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine  175291-56-2  中文名：Fmoc-蘇氨酸磷酸芐酯  分子式：C26H26NO8P    組織HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性檢測(cè)試劑盒20次

8-Phenyloctanol  10472-97-6  中文名：8-苯基辛醇  分子式：C14H22O    HumanPlateletFactor4,PF-4ELISAKit人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

8-Phenyloctanoic acid  26547-51-3  中文名：8-苯基辛酸  分子式：C14H20O2    兔子脂聯(lián)素(ADP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。