產(chǎn)品名稱(chēng) | 人腎上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng) | 英文名稱(chēng) | Human Kidney : Normal Kidney Epithelial Cell Derivatives | 貨號(hào) | EYX99013 |
人腎上皮細(xì)胞提取物【Human Kidney : Normal Kidney Epithelial Cell Derivatives】 人腎上皮細(xì)胞提取物是從人腎上皮細(xì)胞提取的,人腎上皮細(xì)胞從正常人腎組織制備。正常人腎組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB 和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明: 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
 操作要點(diǎn): 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 致病性蠟樣芽孢桿菌雙重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒TTorososide A1656892 五種致瀉性大腸埃希氏菌多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒(A版本)TTopiramate9729托吡酯 五種致瀉性大腸埃希氏菌多重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒(B版本)TTolvaptan168托伐普坦 副溶血性弧菌/tdh/trh毒力基因三重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒TToltrazuril6043托曲珠利 副溶血性弧菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒TTolazoline hydrochloride597鹽酸妥拉唑林 Pemetrexed 中文名:培美曲塞二鈉 分子式:C20H21N5O6 度:98.0% 小鼠白介素2(IL-2)ELISAKit 4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 中文名: 分子式:C16H16N4O3 度:98.0% 小鼠白介素4(IL-4)ELISAKit Pemetrexed di 中文名:培美曲塞二鈉 分子式:C21H23N5Na2O6 度:98.0% 小鼠17-類(lèi)固醇(17-KS)ELISA試劑盒 Ethyl 5-amino-4-cyano-3-(2-ethoxy-2-oxoethyl)thiophene-2-carboxylate 中文名: 分子式:C12H14N2O4S 度:98.0% 小鼠17羥孕(17-OHP)ELISA試劑盒 5-Fluorouracil 中文名: 分子式:C4H3FN2O2 度:98.0% 小鼠17羥皮質(zhì)類(lèi)固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒 皂土(膨潤(rùn)土)(Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑) Bentonite 質(zhì)量規(guī)格:Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑 犬透明質(zhì)酸(HA)試劑盒 Canine Hyaluronic acid,HA ELISA Kit 皂土(膨潤(rùn)土)(Bentone SD-2,適于中高極性溶劑) Bentonite 質(zhì)量規(guī)格:Bentone SD-2,適于中高極性溶劑 犬透明質(zhì)酸酶1(HAase 1)試劑盒 Canine Hyaluronidase 1,HAase 1 ELISA Kit 活性炭粉(AR,200目,粉末狀,褐色) Activated charcoal 質(zhì)量規(guī)格:AR,200目,粉末狀,褐色 犬透明質(zhì)酸酶2(HAase 2)試劑盒 Canine Hyaluronidase 2,HAase 2 ELISA Kit 活性炭(CP,200目,粉末狀,褐色) Activated charcoal 質(zhì)量規(guī)格:CP,200目,粉末狀,褐色 犬透明質(zhì)酸酶3(HAase 3)試劑盒 Canine Hyaluronidase 3,HAase 3 ELISA Kit 活性炭顆粒(AR,20-50目) Activated charcoal 質(zhì)量規(guī)格:AR,20-50目 犬透明質(zhì)酸酶4(HAase 4)試劑盒 Canine Hyaluronidase 4,HAase 4 ELISA Kit 活性炭(電鍍脫色,200目,from wood) Activated charcoal 質(zhì)量規(guī)格:電鍍脫色,200目,from wood 犬維生素A(VA)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminA,VAELISAKit 96T/48T 活性炭(催化劑載體,8-16目) Activated charcoal 質(zhì)量規(guī)格:催化劑載體,8-16目 犬維生素A(VA)試劑盒 Dog Vitamin A,VA ELISA Kit 活性炭(凈水、氣體化,棒,φ1.0mm) Activated charcoal 質(zhì)量規(guī)格:凈水、氣體化,棒,φ1.0mm 犬維生素E(VE)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminE,VEELISAKit 96T/48T 活性炭(凈水、氣體化,10-24目) Activated charcoal 質(zhì)量規(guī)格:凈水、氣體化,10-24目 犬維生素E(VE)試劑盒 Canine Vitamin E,VE ELISA Kit 活性炭(電鍍脫色,40-60目,from Nutshell) Activated charcoal 質(zhì)量規(guī)格:電鍍脫色,40-60目,from Nutshell 犬維生素K1(VK1)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminK1,VK1ELISAKit 96T/48T 人腎上皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)Stavudine 3056-17-5 中文名:司他夫定 分子式:C10H12N2O4 HumanAi-SomaticMuscleAibody,ASAELISAKit 人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 Albendazole 54965-21-8 中文名:阿苯達(dá)唑 分子式:C12H15N3O2S Humancytokeratin20,CK-20ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白20(CK-20)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine 175291-56-2 中文名:Fmoc-蘇氨酸磷酸芐酯 分子式:C26H26NO8P 組織HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性檢測(cè)試劑盒20次 8-Phenyloctanol 10472-97-6 中文名:8-苯基辛醇 分子式:C14H22O HumanPlateletFactor4,PF-4ELISAKit人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 8-Phenyloctanoic acid 26547-51-3 中文名:8-苯基辛酸 分子式:C14H20O2 兔子脂聯(lián)素(ADP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 運(yùn)輸和保存: 視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。 1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。 |