PrimaCell™人肺動脈成纖維細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

RatFactor-relatedApoptosis,FASELISA試劑盒大鼠凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  117047-07-1別名：品牌  3’-Methoxy Puerarin

小鼠組織型纖溶酶原激活因子(tPA)ELISA試劑盒 ，英文名： tPA ELISA Kit  23445-00-3當藥醇苷規(guī)格  Swertianolin 

鴨白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒DuckIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T  2469-34-3遠志皂苷元  Senegenin

犬抑制素β-B(Inhbb)試劑盒 Canine inhibin beta-B,Inhbb ELISA Kit  7518-22-1楤木皂苷A說明書  Cantleyoside

英文名稱MouseBTCELISAKit小鼠BTCELISAKit規(guī)格：96T/48T  吳茱萸苷品牌  Cantleyoside
去甲斑蝥酸鈉品牌   Demethylcantharidate   組織溶酶體型酸性1酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒20

青陽參苷元B  Qingyangshengenin B   組織人體腺病毒(adenovirus)定性檢測試劑盒20

青陽參苷元A說明書  Qingyangshengenin A   組織人體腺病毒(adenovirus)定量PCR擴增檢測試劑盒20

芹菜素-7-O-槐糖苷規(guī)格  Apigenin-7-O-β-D-sophoroside    組織人體鼻病毒(rhinovirus)定量PCR擴增檢測試劑盒20

千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷說明書   Oroxylin A 7-O-glucuronide   組織人體鼻病毒(rhinovirus))定性檢測試劑盒20
MouseActivinA,ACV-AELISA試劑盒小鼠活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  83-49-8豬去氧膽酸   Hyodeoxycholic acid

小鼠粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC1 ELISA Kit  89412-79-3竹節(jié)香附素A說明書  Raddeanin A

小鼠內(ET)ELISA檢測試劑盒Mouseendotoxin,ETELISAKit 96T/48T  517-88-4紫草素品牌  shikonin

人相關抗原7(SPAG7)試劑盒 Human sperm associated aigen 7,SPAG7 ELISA Kit  28831-65-4紫草酸規(guī)格  Lithospermic acid

RatAndrostenedione,ASDELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  118-34-3紫丁香苷  Syringin
PrimaCell™人肺動脈成纖維細胞試劑盒價格107912-97-0西伯利亞遠志糖A5規(guī)格  Sibiricose A5  英文名稱RatCTELISAKit大鼠降鈣素(CT)規(guī)格：96T/48T

107912-97-0西伯利亞遠志糖A5  Sibiricose A5  英文名稱RatCTELISAKit大鼠降鈣素(CT)規(guī)格：96T/48T

107668-79-1草烏甲素說明書  Bulleyaconitine A   英文名稱RatCrossLapsELISAKit大鼠骨原交聯(lián)(CrossLaps)規(guī)格：96T/48T

107534-93-0安五脂素  Anwuligan   英文名稱RatCrossLapsELISAKit大鼠骨原交聯(lián)(CrossLaps)規(guī)格：96T/48T

107438-79-9銀杏內酯J品牌  Ginkgolide J  英文名稱RatCRHELISAKit大鼠促腎上皮質激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。