產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™小鼠淋巴成纖維細胞試劑盒價格 | 英文名稱 | | 貨號 | EYX99602 |
PrimaCell™小鼠淋巴成纖維細胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 
實驗要點及說明; 1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
 操作要點; 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。 載玻片細胞TNFALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 41753-43-9人參皂苷Rb1規(guī)格 Ginsenoside Rb1 Mouse16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1ELISA試劑盒小鼠16α羥基雌同1(16-αOHE-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 11021-13-9人參皂苷Rb2 Ginsenoside Rb2 小鼠脂氧合酶同工酶1(LOX-1)ELISA試劑盒 ,英文名: LOX-1 ELISA Kit 68406-26-8人參皂苷Rb3說明書 Ginsenoside Rb3 牛血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA檢測試劑盒BovinSerumamyloidA,SAAELISAKit 96T/48T 11021-14-0人參皂苷Rc品牌 Ginsenoside Rc 人apelin 12(AP12)試劑盒 Human apelin 12,AP12 ELISA Kit 52705-93-8人參皂苷Rd規(guī)格 Ginsenoside Rd 478-01-3川陳皮素規(guī)格 Nobiletin 植物DNA甲基轉移酶(MET)總活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20 477-90-7巖白菜素說明書 Bergenin 植物25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA檢測試劑盒Pla25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISAKit 96T/48T 477-85-0決明蒽醌品牌 Obtusifolin 植物1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性比色法定量檢測試劑盒20 477-43-0去氫木香內(nèi)酯說明書 Dehydrocostus lactone 植物1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性熒光定量檢測試劑盒20 4773-96-0芒果苷品牌 Mangiferin 植物1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量檢測試劑盒20 人Alpha-D 酚/維生素E(Alpha-D TPL)試劑盒 Human Alpha-D-tocopherol,Alpha-D TPL ELISA Kit 39011-90-0芍藥內(nèi)酯苷規(guī)格 Alibiflorin 英文名稱MouseIerleukin23ELISAKit小鼠白介素23(IL-23)規(guī)格:96T/48T 484-12-8蛇床子素 Osthole 冰凍切片總游離膽菲律賓(FILIPIN)熒光染色試劑盒50 611-40-5射干苷說明書 Tectoridin RatChorionicGonadoophin,CGELISA試劑盒大鼠絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 541-91-3麝香酮品牌 Muscone 小鼠脂聯(lián)素(Adiponectin)ELISA試劑盒 ,英文名: Adiponectin ELISA Kit 37921-38-3升麻素規(guī)格 Cimifugin PrimaCell™小鼠淋巴成纖維細胞試劑盒價格479-91-4蔓荊子黃素 Vitexicarpin 植物S腺苷同型半胱氨酸核苷酶(AdoHcynucleosidase)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20 479-41-4靛玉紅說明書 Indirubin 植物P型氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20 478-61-5小檗胺規(guī)格 Berbamine 植物P型ATP酶(PtypeATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20 478-43-3大黃酸品牌 Rhein 植物N-糖基糖蛋白樹脂法化試劑盒5 478-01-3川陳皮素品牌 Nobiletin 植物NADPH氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒20(10樣本) 運輸和保存; 視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。 1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 |