PrimaCell™小鼠血管內(nèi)皮細胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | PrimaCell™小鼠血管內(nèi)皮細胞試劑盒培養(yǎng) | | EYX99579 |

我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。 細胞培養(yǎng)方法; 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
 實驗事項; 1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。 2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。 3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。 4. 洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數(shù)。 5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。 6. 反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。 7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準確性。 如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。 注意事項; 1. 接收到,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 英文名稱HumanAdiponectinELISAKit人脂聯(lián)素(ADT)規(guī)格:96T/48T 84954-93-8絡(luò)塞琳 Rosarin 超氧化物歧化酶(SOD)植物裂解樣品制備試劑盒50 85026-55-7絡(luò)緦說明書 Rosin Ratgrowthhormone,GHELISA試劑盒大鼠生長激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 84954-92-7絡(luò)塞維品牌 Rosavin 小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(AIL)ELISA試劑盒 ,英文名: AIL ELISA Kit 33464-71-0絡(luò)石苷規(guī)格 Tracheloside 犬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/DLA)ELISA檢測試劑盒Caninemajorhistocompatibilitycomplex,MHC/DLAELISAKit 96T/48T 29838-67-3落新婦苷 Astilbin 5240-95-9羊藿素品牌 Icaritin 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染試劑盒10 523-50-2異補骨脂素品牌 Angelicin 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)態(tài)表達細胞克隆凍存試劑盒50 522-97-4四氫小檗堿品牌 Tetrahydroberberine,THB 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)態(tài)表達細胞克隆凍存試劑盒50 522-97-4四氫小檗堿規(guī)格 Tetrahydroberberine 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒感染試劑盒20 52286-74-5人參皂苷Rg2規(guī)格 Ginsenoside Rg2 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(AIL-R3)ELISA檢測試劑盒Monkeytumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AIL-R3ELISAKit 96T/48T 犬皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)試劑盒 Canine Coicosterone,CO ELISA Kit 134418-28-3脫水穿心蓮內(nèi)酯規(guī)格 dehydroandrographolide 英文名稱HumanProinsulinELISAKit人胰島素原(PI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 19130-96-2脫氧野尻霉素 1-Deoxynojirimycin 化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達載體(pGEFP-AM)測序引物對2OD 53452-16-7王不留行黃酮苷說明書 Vaccarin Rathiston-H2bELISA試劑盒大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 2182-14-1文多靈品牌 Vindoline 小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒 ,英文名: LPL ELISA Kit 13476-25-0烏藥內(nèi)酯規(guī)格 Linderane PrimaCell™小鼠血管內(nèi)皮細胞試劑盒培養(yǎng)35825-57-1隱丹參酮說明書 Cryptotanshinone 載玻片細胞IKB-ALPHA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20 35790-95-5α-常春藤苷品牌 α-hederin 載玻片細胞IGF蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20 357-70-0加蘭他敏品牌 Galanthamine 載玻片細胞HISTONEH3蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20 3570-40-9白綿馬素AA說明書 Albaspidin AA 載玻片細胞GSK-3BETA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20 35354-74-6和厚樸酚品牌 Honokiol 載玻片細胞GSK-3ALPHA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20 |