人食管癌組織源成纖維細(xì)胞提取物【Human Cancer: Esophageal Cancer Fibroblast Derivatives】

人食管癌組織源成纖維細(xì)胞提取物是從人食管癌組織源成纖維細(xì)胞提取的，人食管癌組織源成纖維細(xì)胞從人食管癌組織制備。人食管癌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

犬狂犬抗體ELISA檢測試劑盒192Methyl 3-amino-[[(2'-cyanobiphenyl-yl)methyl]amino]benzoate13648

羊（sheep）羊痘病毒抗體（Capripox-Ab）ELISA檢測試劑盒19211β-Hydroxy'-methyl'βH-pregna,4-die7,16-d]oxazole,-dione136498

口蹄疫O型抗體ELISA檢測試劑盒（牛羊豬通用，阻斷法）192Deflazacort144847地夫可特

肺炎支原體單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Cortisone acetate19/4/4醋酸可的松

銅綠假單胞菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Hydroxyprogesterone686羥孕酮
Methyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C22H17N3O4  度：98.0%  小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A   英文名稱：   Mouse Pulmonary surfacta associated protein type A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SP-A

Ethyl2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C14H18N2O6  度：98.0%  小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D   英文名稱：   Mouse Pulmonary surfacta associated protein type D   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SP-D

Trenbolone cyclohexylmethylcarbonate  中文名：群勃龍環(huán)己甲基碳酸酯  分子式：C26H34O4  度：98.0%  小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A7   英文名稱：   Mouse S100 Calcium Binding Protein A7   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   S100A7

Ceftiofur hydrochloride  中文名：頭孢噻呋鹽酸鹽  分子式：C19H18ClN5O7S3  度：98.0%  小鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸(AcSDKP)ELISA試劑盒  

Cefquinome  中文名：頭孢喹咪  分子式：C23H24N6O5S2  度：98.0%  小鼠N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒
米帕明/丙咪嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）  Clomipramine HCL   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 超氧化物歧化酶(SOD)酵母/真菌裂解樣品制備試劑盒50

硫酸氫氯吡格雷 I型  Clopidogrel Bisulfate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,I型 超氧化物歧化酶(SOD)細(xì)胞裂解樣品制備試劑盒50

硫酸氫氯吡格雷 II型(標(biāo)準(zhǔn)品)  Clopidogrel Bisulfate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 超氧化物歧化酶(SOD)細(xì)胞裂解樣品制備試劑盒50

硫酸氫氯吡格雷 II型  Clopidogrel Bisulfate  質(zhì)量規(guī)格：含量97.0%-101.5%，II型 超氧化物歧化酶(SOD)細(xì)菌裂解樣品制備試劑盒50

萘丁美酮/萘普酮  Nabumetone  質(zhì)量規(guī)格：>99% 超氧化物歧化酶(SOD)植物裂解樣品制備試劑盒50

萘丁美酮/萘普酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  Nabumetone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 超氧化物歧化酶(SOD)植物裂解樣品制備試劑盒50

地瑞拉韋  Darunavir  質(zhì)量規(guī)格：>98% 超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50

沃氏物  Methoxydienone  質(zhì)量規(guī)格：含量≥85% 超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50

DL-α-羥基戊二酸二鈉  DL-α-Hydroxyglutaric acid di salt   質(zhì)量規(guī)格：98%,GC,進(jìn)分sigma 94577 超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液1毫升/500毫摩爾

地美胺  Demecarium Bromide   質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 沉淀法去內(nèi)試劑盒20
人食管癌組織源成纖維細(xì)胞提取物價(jià)格β-Sitosterol  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O    應(yīng)急反應(yīng)生長因子-1   英文名稱：   Early growth response 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EGR-1

β-Anhydrouzarigenin  中文名：  分子式：C23H32O3    轉(zhuǎn)錄因子E2F1   英文名稱：   anscription factor E2F1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   E2F1

α-Tocopherolquinone  中文名：  分子式：C29H50O3    腺來源的內(nèi)皮生長因子   英文名稱：   endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EG-VEGF

α-Spinasterone  中文名：  分子式：C29H46O    中性粒細(xì)胞蛋白酶抑制劑Elafin   英文名稱：   neuophil elastase inhibitor Elafin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Elafin

α-Spinasterol glucoside  中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6    游離脂肪酸（NEFA）檢測   Total iron binding (TIBC) detection