人甲狀腺癌組織源細(xì)胞提取物【Human Cancer: Breast Cancer Tissues CellsDerivatives】

人甲狀腺癌組織源細(xì)胞提取物是從人原代甲狀腺癌組織源細(xì)胞提取的，人原代甲狀腺癌組織源細(xì)胞從人甲狀腺癌組織制備。人甲狀腺癌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

噻苯隆溶液（TDZ）5×1ml2-Aminonicotinic acid534572-氨基煙酸

脫落酸溶液(ABA)5×1ml2-Amino-N-(2-chloro-methylphenyl) thiazole-carboxamide29644

伊紅染色液0ml 2-Aminoisonicotinic acid1336282-氨基異煙酸

胰酶消化液0ml2-Aminofluorene15382-氨基芴

吲哚丁酸溶液（IBA）5×1ml2-Aminodiphenylamine5345鄰氨基
Mizolastine  108612-45-9  中文名：咪唑司汀  分子式：C24H25FN6O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子 (mouse G-CSF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) R&D  

Mitiglinide calcium  145525-41-3  中文名：米格列奈鈣  分子式：C19H25NO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒  

Minoxidil  38304-91-5  中文名：米諾地爾  分子式：C9H15N5O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠可溶性壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA試劑盒  

Minocycline hydrochloride  13614-98-7  中文名：  分子式：C23H28ClN3O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒  

Minisecolide C  1967030-77-8  中文名：  分子式：C28H34O7  度：%  關(guān)鍵詞：    小鼠可溶性細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒
鹽酸伊立替康-d10  Irinotecan-d10 Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanOncostatinM，OSMELISAKIT人抑瘤素M(OSM)規(guī)格：96T/48T

硫酸卡那霉素  Kanamycin sulfate  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanoponinIELISAKit人肌鈣蛋白-I(Tn-I)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

卡那霉素A  Kanamycin A  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanOsteocalcinELISAKit人骨橋素(Osteocalcin)規(guī)格：96T/48T

卡那霉素B硫酸鹽  Kanamycin B sulfate  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanOsteopoin，OPNELISAKIT人OPN規(guī)格：96T/48T

卡那霉素A硫酸鹽  Kanamycin A Sulfate  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanOsteoprotegerinELISAKIT人骨保護(hù)素(OPG)規(guī)格：96T/48T

拉坦前列素內(nèi)酯二醇  Latanoprost Lactone Diol  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanOxLDLELISAKit人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)規(guī)格：96T/48T

拉坦前列腺素內(nèi)半縮醛  Latanoprost Lactol  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanP53ELISAKit人P53(P53)規(guī)格：96T/48T

rac 來(lái)那度胺-13C5  rac Lenalidomide-13C5  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanPAFELISAKit人血小板活化因子(PAF)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

4,4',4''-Methylidynetrisbenzonitrile  4,4',4''-Methylidynetrisbenzonitrile  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanPAI-1ELISAKit人纖溶酶原激活劑抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4,4'-(4H-1,2,4-Triazol-4-ylmethylene)bis benzonitrile (來(lái)曲唑相關(guān)雜質(zhì)A)  4,4'-(4H-1,2,4-Triazol-4-ylmethylene)bis benzonitrile (Letrozole Related Compound A)  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 英文名稱HumanPAIELISAKit人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)規(guī)格：96T/48T
人甲狀腺癌組織源細(xì)胞提取物價(jià)格Withaphysalin A  中文名：  分子式：C28H34O6  度：98.0%  兔內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒  

Aspergillon A  中文名：  分子式：C22H32O  度：98.0%  兔內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒  

Convallagenin B  中文名：鈴蘭皂苷元B  分子式：C27H44O6  度：97.5%  兔緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒           

Glycoursodeoxycholic acid  中文名：甘氨熊脫氧膽酸  分子式：C26H43NO5  度：98.5%  兔心肌肌鈣蛋白Ⅰelisa試劑盒   兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒、兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Periplocin  中文名：杠柳毒苷  分子式：C36H56O13  度：98.5%  兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物elisa試劑盒   兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物試劑盒、兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。