大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物【Rat Intestine: Normal Rectal Smooth Muscle Cell Derivatives】

大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物是從大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取的，大鼠直腸平滑肌細(xì)胞從正常大鼠直腸組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

甲型H1N1流感病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48EzetimibeBBP298依澤替米貝

季節(jié)性H1流感病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Imatinib mesylate21277伊馬替尼

季節(jié)性H3流感病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Imatinib1524595伊馬替尼

甲型H3N2流感病毒雙重?zé)晒?/span>PCR 檢測(cè)試劑盒48Mitiglinide calcium1455251米格列奈鈣

H7N9病毒雙重?zé)晒?/span>PCR 檢測(cè)試劑盒489-Aminominocycline hydrochloride1499341
Humanimmunoglobulinheavychain,IgHELISAKit 人球蛋白重鏈(IgH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1,3-Bis(4,5-dihydro-2-oxazolyl)benzene  中文名：1,3-雙(4,5-二氫-2-惡唑)苯  分子式：C12H12N2O2  度：98.0%

humanImmunoglobulinE,IgEELISAKit 人球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1-Testosterone  中文名：1-睪酮  分子式：C19H28O2  度：98.0%

Humanhiston-H2bELISAKit 人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1-Indanone  中文名：  分子式：C9H8O  度：98.0%

Humanheterogeneousnuclearribonucleoproteincompies/ai-RA33-aibody,hNP/RA33ELISAKit 人異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物/抗RA33抗體(hNP/RA33)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  (S)-4-Benzyl-2-oxazolidinone  90719-32-7  中文名：(S)-4-芐基-2-噁唑烷酮  分子式：C10H11NO2  度：98.0%   

HumanHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKit 人幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1,2-Bis(phenylthio)ethane  中文名：1,2-雙(苯硫基)乙烷  分子式：C14H14S2  度：98.0%
維生素E  Vitamin E  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineIerferonβ,IFN-β/IFNBELISAKit 96T/48T

D-α-生育酚琥珀酸鹽  D-α-Tocopheryl Succinate  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬白介素17(IL-17)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineierleukin17,IL-17ELISAKit 96T/48T

(+)-α-生育酚醋酸鹽  (+)-α-Tocopherol acetate  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬白介素1α(IL-1α)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineIerleukin1α,IL-1αELISAkit 96T/48T

ent-那格列奈  ent-Nateglinide  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineCompleme3,C3ELISAKit 96T/48T

ent-那格列奈酰基-β-D-葡萄糖苷酸  ent-Nateglinide Acyl-β-D-glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬腸三葉因子(ITF)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineIestinalefoilfactor,ITFELISAKit 96T/48T

那格列奈?；?/span>-β-D-葡萄糖苷酸  Nateglinide Acyl-β-D-glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcinelisteriolysinELISAKit 96T/48T

4-羥苯基馬拉維若  4-Hydroxyphenyl Maraviroc  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit 96T/48T

依澤替米貝酮  Ezetimibe Ketone  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬壞死因子α(TNF-α)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcinetumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKit 96T/48T

3-O-乙酰依澤替米貝  3-O-Acetyl Ezetimibe  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit 96T/48T

依澤替米貝羥基β-D-葡萄糖苷酸   Ezetimibe Hydroxy β-D-Glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口 豬皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineCoicosterone,COELISAKit 96T/48T
大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物價(jià)格人肌聯(lián)蛋白   英文名稱：   Human titin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TTN  Rivaroxaban  366789-02-8  中文名：利伐沙班  分子式：C19H18ClN3O5S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人骨形成蛋白(BMPs)ELISAKit     Thiamphenicol  15318-45-3  中文名：甲砜霉素  分子式：C12H15Cl2NO5S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit     3,3'-Sulfonyldianiline  中文名：3,3'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S  度：98.0%

人骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISAKit     2-Benzothiazolyl diethyldithiocarbamate  95-30-7  中文名：二乙基二硫代氨基甲酸 2-苯并噻唑酯  分子式：C12H14N2S3 

人骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit                 3,3'-Sulfonyldianiline  中文名：3,3'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。